PEG化可降解PEI-Et的构建、筛选和Smad3基因输送研究.pdfVIP

上海交通大学医学院硕士论文 PEG 化可降解PEI-Et 的构建、筛选及Smad3 基因输送研究 摘 要 动脉粥样硬化有关的疾病是导致死亡最主要的原因，其血管存在不 同程度的损伤。研究发现血管损伤后，血管平滑肌细胞由静止的、分化 状态转变为增殖状态。血管平滑肌细胞增殖的分子机制还不清楚，其中 之一与Smad3 基因有关。血管损伤后转化生长因子（TGF-β ）的表达水 平上调，TGF-β 通过Smad3 信号通路促进血管平滑肌细胞增殖。 将 Smad3 基因安全有效的转入血管平滑肌细胞，基因载体是关键。 在各类基因载体中，聚阳离子非病毒载体具有安全、基因担载大、化学 结构可控、易于化学修饰等优点。本实验将PEI 800 Da 作为基本结构单 元，以亚乙基二氯甲酸酯作为交联剂合成阳离子聚合物-PEI-Et ，并对其 进行聚乙二醇（PEG ）修饰，以屏蔽PEI-Et 表面过量的正电荷，使其在 保有较高转染活性的基础上，降低载体的细胞毒性。 本论文第一部分研究内容是将PEI-Et 与PEG 以不同的摩尔比例（1:1、 2:1、1:2）合成三种不同的PEG-Et 阳离子聚合物，并研究其与基因缩合 形成的复合物的特征、细胞毒性、转染效率，以筛选出最佳基因输送载 I 上海交通大学医学院硕士论文 体即 PEG-Et 1:1 。第二部分研究内容是将 PEG-Et 1:1 作为载体运载 shSmad3、Smad3 基因进入兔主动脉平滑肌细胞，运用PCR、Western blot 检测细胞内Smad3 基因的表达，CCK8 实验检测细胞的增殖。 本论文中，我们成功合成PEG-Et 1:1，证明其具有缩合基因的能力、 细胞毒性低、转染效率高。抑制血管平滑肌细胞内 Smad3 基因的表达， 可抑制血管平滑肌细胞的增殖。为进一步研究体内输送Smad3 基因奠定 了一定的基础。 关键词：非病毒载体，PEG-Et ，兔主动脉平滑肌细胞，Smad3 基因，细 胞毒性，转染效率 II 上海交通大学医学院硕士论文 CONSTRUCTION, SCREENING OF BIOD- -EGRADABLE PEGYLATED PEI-ET AND SMAD3 GENE DELIVERY ABSTRACT Atherosclertic-associated diseases are the leading cause of death. There are varying degrees of vascular injury. In response to injury, vascular smooth muscle cells (VSMCs) transform from a quiescent, differentiated state to a proliferative and synthetic phenotype. The molecular mechanisms that trigger VSMC proliferation after vascular injury remain unclear, one of that is Smad3 gene. Transforming growth factor-β (TGF-β) is upregulated at sites of vascular injury. TGF-β, through Smad3 signaling, stimulates VSMC proliferation. Smad3 gene is able to transport into the VSMCs effectively and safely, gene