pEGFP-PTEN的构建和其在子宫内膜癌细胞HEC-1B中的表达.pdfVIP

摘要 摘要 目的： 采用基因同源重组技术，构建携带外源性野生型PTEN基因的重组pEGFP 质粒，将外源性PTEN基因导入子宫内膜癌细胞HEC．1B中，观察外源性野生 型PTEN对HEC一1B细胞增殖的影响，为子宫内膜癌的基因治疗提供理论基础。 方法： 应用RT-PCR方法从正常人胚肾细胞293T中获得PTEN片段，应用基因重 组技术先克隆至pMDl8．T载体，将产物进行测序分析及双酶切后与pEGFP．N2 组质粒转染至子宫内膜癌细胞HEC．1B中，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在 HEC一1B细胞内的表达情况，Westernblot法检测PTEN蛋白的表达，转染成功 后通过MTT法检测融合蛋白对子宫内膜癌细胞HEC．1B增殖的影响。 结果： 泳检测到两个大小分别为1．4kb和4．7kb的片段；外源性野生型PTEN基因在子 宫内膜癌HEC．1B细胞中成功表达，蛋白质印迹(Westernblot)检测出质粒转 染组中PTEN蛋白质高表达；过表达的野生型PTEN能有效抑制HEC．1B细胞 的生长(PO．05)。 结论： 成功构建了pEGFP．N2．PTEN重组真核表达质粒，经脂质体转染后可在子宫 内膜癌HEC．1B细胞中高表达；外源性野生型PTEN对HEC．1B细胞的增殖有 抑制作用。 关键词：pEGFP-N2-PTEN；质粒构建；子宫内膜癌细胞 Abstract ABSTRACT Objective： To the betweenPTENandendometrialcarcinoma studyrelationships byusing to molecularEGFP-PTEN transfectedHEC-1 vector,which B， cloning CO—expression then theeffectsofthe ofactivatedhumanendometrial investigate proliferation carcinoma invitro． B1 cells(HEC-1 Methods： was fromHEK293Tcells PTEN obtained gene byreversingtranscription chainreactionandwasclonedinto 1$-Tto the polymerase pMD analyzesequence． was into was ThecorrectPTENinserted vector．pEGFP-N2一PTEN pEGFP-N2 B identified witllrestrictionendonucleases-BamHIandXhoI．HEC-1 bydigestion cellsWastransfected andthe ofPTENWasobserved bypE