双峰驼CYP3A酶体外活性及其对探针药物代谢的影响.pdfVIP

本项目由国家自然科学基金项目资助。 Thisworkwas fromtheNationalNatural grants supportedby ScienceFoundationof 1 China(3260623)． 摘 要 CYP3A酶参与机体内源性物质和外源性物质的生物转化，在调节机体与外环境的 相互作用以及保持机体内环境稳态中发挥着重要作用。双峰驼是国家二级保护动物， 但有关它适应恶劣环境的独特生物学特性，以及对外源性药物和毒物的处置能力等相 关科学研究却相对滞后。为了探究双峰驼CYP3A酶的体外活性和对外源性药物代谢的 影响，开展了该项试验。 首先选用Ca}沉淀法制备双峰驼肝微粒体，后运用生物化学方法对细胞色素P450 酶系进行了初步检测。结果表明，BCA法测定双峰驼肝微粒体蛋白悬液的浓度为1．936 ±O．052 nmol／mg， nmol／mg，还原差示光谱法测定的细胞色素b；(Cytb；)的含量为0．248+0．070 通过红霉素-N-脱甲基酶的活性来评价CYP3A酶的活性，得到红霉素一N一脱甲基酶的活 性为1．3754-0．062nmol·mg～·min～。 其次又以探针药物咪达唑仑(MDZ)与双峰驼肝微粒体共同孵育15min后，以混 有内标地西泮(DZP)的冰冷甲醇作为反应终止剂终止反应，并采用高效液相色谱紫 流动相为乙腈：PBS(0．01M，pH7．0)=40：60，等浓度洗脱20min，检测波长为 254 nm，流速为0．8 min、11．383 的出峰保留时间分别为6．710 min和15．263min，各成分色谱峰分离 良好。利用以上方法对双峰驼肝微粒孵育体系进行了优化，得到最适底物MDZ的浓度 为7．073Pmol／L，最适肝微粒体蛋白浓度为0．050 min， mg／mL，最佳孵育时问为15 同时测定了部分药物动力学参数，最大反应速度V。为0．380±0．028pmol啊in～”矿。， 米氏常数K．为9．603±3．229 虬·min一·m91。 最后，还进行了酮康唑(KET)影响双峰驼肝微粒体CYP3A酶活性的试验，发现 KET对双峰驼肝微粒体CYP3A具有强大而不可逆的竞争性抑制作用，其半抑制浓度IC翮 为0．168±0．068pmol／L。 通过本研究成功制备了能满足崩于体外药物代谢的双峰驼肝微粒体悬浮液，建立 了CYP3A酶的特异性探针药物咪达唑仑及其代谢产物的HPLC紫外检测方法，并对该 酶的体外代谢活性和特点进行了初步研究。研究成果为今后开展双峰驼CYP3A酶的体 内活性及CYP酶其他亚犁的体外活性研究奠定了基础，也填补了该研究领域的空白。 关键词：双蜂驼：肝微粒体：CYP3A；探针药物 ActivitiesofBactrianCamelCYP3A In Vitro Enzyme andIts InfluenceonMetabolismofProbe Drugs Abstract CYP3A inthe biotransformationof and enzymepa