RUNX3表达及胃癌生物学特点关系的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· RUNX3表达与胃癌生物学特点关系的研究 目 的 胃癌(Gastric Cancer)是我国常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类的健康。 近年来，胃癌患者的整体疗效虽然有所提高，但这主要得益于以早期发现、早期 诊断、早期治疗为主的胃癌“三早工作的不断开展。目前，中晚期胃癌在住院 患者中仍占有较大比例，相当一部分患者在确诊时已失去手术时机，综合治疗后5 年生存率始终徘徊在30％-40％。根治术后复发和转移是影响胃癌预后的主要原 因。因此，深入研究胃癌的发病机制、发展过程和有效地综合治疗靶点是进一步 提高胃癌综合治疗疗效的关键。 已有研究认为，胃癌的发生和发展是一个多基因、多步骤参与的过程。包括 癌基因的激活、抑癌基因的失活等等。近年来，随着分子生物学技术的不断发展， 一系列与胃癌发生、发展关系密切的基因被发现，并得到深入研究和认识。然而， 已有的研究结果仍然不能解释胃癌所有的发生事件，说明还有其它参与其中的基 因或机制未得到认识。 Runt．Related Factor3，RUNX3) 人类Runt相关转录因子3(HumanTranscription 是Runt家族中新近认识，并为广泛关注的一个基因，是哺乳动物Runt家族进化的 亚单位含有一个128个氨基酸的高度保守的Runt域，位于氨基末端，形成一个S形 免疫球蛋白折叠。a亚单位需要与D亚单位形成二聚体后才能识别同源的DNA结合 序列以介导蛋白质之间的相互作用。RUNX3蛋白的羧基末端在转录调节中起作 用。研究发现，敲出R17NX3基因的小鼠胃粘膜上皮细胞由于过度增殖和凋亡抑制 而出现异型增生，并且对TGF．B诱导的生长抑制和凋亡失敏感。人胃癌细胞系在 裸鼠的致癌性与RUNX3的表达水平负相关。说明，RUNX3在正常胃粘膜中发挥着 重要的生理作用，是胃上皮的主要生长调控因子。RUNX3在胃癌中的失活可能抑 制胃粘膜上皮凋亡、促进增生和转移，是胃癌的重要的致癌因素。 目前，关于RUNX3与胃癌的关系研究较少。因此，本研究旨在考察RUNX3 在胃癌组织中的表达情况及其与胃癌临床病理学特点的关系；研究RUNX3表达变 化的分子机制；探讨其表达变化与胃癌细胞增殖、粘附及侵袭的关系。 方 法 一、RUNX3基因在人胃癌组织中表达及其与胃癌临床病理特点的 关系 采用实时定量PCR法检测52例胃癌组织及癌旁5cm以外经病理学证实的非癌 组织RIYNX3表达情况，并与临床病理学指标比较； 采用免疫组化法检测103例胃癌组织及癌旁5cm以外经病理学证实的非癌组 织RUNX3表达情况，并与临床病理学指标比较。 二、胃癌RUNX3基因启动子高甲基化及其临床意义的研究 采用MSP技术检测52例胃癌及癌旁5cm以外经病理学证实的非癌组织中 RUNX3基因启动子区CpG岛高甲基化状况，并分析其与胃癌临床病理参数之间的 关系。 三、RUNⅪ基因低表达与胃癌细胞增殖、粘附、侵袭关系的研究 癌细胞系中RUNX3表达情况，筛选表达水平最低细胞系作为进一步研究对象； 利用分子克隆方法构建RUNX3逆转录病毒载体，并进行酶切及测序鉴定； 定转染克隆进行鉴定： 力的影响； 采用MTT法检测上调RUNX3基因对SGC．7901细胞增殖能力的影响； 影响。 2 9士 甲 ；口7卜 一、RUN淞基因在人胃癌组织中表达及其与胃癌临床病理特点的 关系 实时定量PCR检测RI胍3 mRNA表达水平显著低于其配对癌旁非癌胃粘膜 mRNA表达 水平低于癌旁非癌胃粘膜表达水平的2倍以上。RNUX3mRNA低表达与性别 浸润深度(尸=O．048)、淋巴结转移(卢0．005)密切相关。 RUNX3蛋白主要在细胞核内表达，为核内棕黄或黄色颗粒。RUNX3在非癌胃 粘膜中呈阳性或强阳性表达，在胃癌组织中呈阴性或弱阳性表达。103