SFRP5基因甲基化参与P-糖蛋白介导白血病多药耐药的探究.pdfVIP

·中文论著摘要· SFRP5基因甲基化参与P．糖蛋白介导 白血病多药耐药的研究 曾言 刖 昌 frizzledrelated 分泌型卷曲相关蛋(secreted proteins，SFRPs)是一种分泌型糖 蛋白家族，由SFRP基因编码。目前研究发现哺乳动物SFRPs家族主要包括 抑制因子。目前有大量的研究显示在肿瘤细胞中SFRPs基因启动子区域存在甲基 化，导致SFRPs蛋白表达缺失或下调，对Writ信号通路的抑制作用减弱，从而促 进肿瘤的形成与发展。SFRP5是SFRPs家族的～个分泌型蛋白，基因定位在 发育早期细胞极性及器官形成。第二，SFRP5参与肥胖形成的调节。第三，在某 些肿瘤中存在SFRP5基因启动子区甲基化，但这种改变在肿瘤发生发展中的作用 尚不明确。有研究显示SFRP5基因甲基化与卵巢癌对顺铂的耐药有关。另有研究 表明SFRP5基因甲基化导致的SFRP5蛋白表达下降可能增加急性髓系白血病复发 的风险。这些研究提示SFRP5在肿瘤的多药耐药形成过程中可能发挥一定的作用。 resistance，MDR)白血病细胞的存在是白血病复发及难治 多药耐药(multidrug resistance 的关键。由多药耐药基因(multidruggene·l，mdrl)编码的P-糖蛋白 mdrl转录增加。因此我们推测作为Writ的抑制因子，SFRP5蛋白可能通过 用，并探索其信号传导通路。通过本研究进一步阐明了SFRPs家族在肿瘤发病中 的作用，并为多药耐药白血病的治疗提供新的靶点。 实验材料与方法 一、SFRP5在白血病中的基因甲基化及蛋白表达情况 因启动子区甲基化状态进行检测。 启动子区甲基化状态进行分析。 3、采用Westemblot方法检测SFRP5蛋白在白血病患者及细胞系中的表达。 l、采用Western blot检测非磷酸化p--catenin在白血病患者及细胞系中表达。 2、采用RT-PCR检测mdrlmRNA在白血病患者及细胞系中的表达。 3、采用Westem blot检测P-gp在白血病患者及细胞系中的表达。 4、使用去甲基化试剂DAC处理P-gp阳性白血病标本，恢复SFRP5表达。 rnRNA 采用Western PCR检测处理后mdrl blot检测处理后P-gp水平，real-time 表达。 三、恢复SFRP5表达以逆转白血病KGIa细胞多药耐药性的研究 蛋白的KGl眈GFP细胞作为对照。 2、采用real．time mRNA表达。 3、采用Western P·gp表达。 厶b 田 -‘1：1 7K 一、SFRP5在白血病中的基因甲基化及蛋白表达情况 2 1) 例正常标本均未发生SFRP5基因甲基化。4种白血病细胞系中均发生SFRP5基因 甲基化。 基化状态进行分析。检测长度494bp，共设计两对引物对该片段进行检测。结果 显示Pl片段长度为224 bp，存在lO个CpGs，总甲基化频率为85．O％。P2片段 长度为270 bp，存在32个CpGs，总甲基化频率为80．O％。 3、采用Western 达情况。结果显示所有6例正常标本均存在SFRP5蛋白表达。在白血病患者标本 中有7例发现SFRP5蛋白表达，而其余5例则未检出SFRP5蛋白表达。4种白血 病细胞系中均未检测到S