STIM1SIM2调控人外周血单核细胞性树突状细胞FcγRII功能.pdfVIP

目 录 1 STIM1/STIM2 调控人外周血单核细胞性树突状细胞 Fc γRII 的功能„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„9 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„13 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„33 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„46 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„52 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„53 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„58 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„60 3 Fc γR 对树突状细胞成熟及效应功能的研究进展 （综述） „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„61 STIM1/STIM2 调控人外周血单核细胞源性树突状细胞 FcγRII 功能 摘要 背景 树突状细胞（DCs ）是体内功能最为强大的专职抗原递呈细胞 (APCs) ，直接调节机体免疫应答和免疫耐受之间的平衡。DCs 的双向 调节功能与其自身发育的不同阶段密切相关，同时DCs 的分化成熟 又与其表面FcR 表达密不可分。我们前期研究发现DCs 及其前体细 胞表面的激活型和抑制型FcγR 参与调控细胞的分化成熟和免疫学功 能。FcγR 参与DCs 分化、成熟以及免疫效应主要由其自身激活型基 序（ITAM ）和抑制型基序（ITIM ）所决定的。基质交感分子-1(STIM1) 是近年发现的Ca2＋通道调节蛋白，堪称细胞内质网上侦测钙离子含 量的感应器（sensor ），是―填充式Ca2+涌入理论‖ （capacitative calcium influx ）体系中的重要分子，具有潜在的有效调节DCs 免疫功能的作 用。基质交感分子-2(STIM2)是调控基础Ca2+流入的主要分子，在Ca2 ＋通道应答的后期阶段扮演重要角色。细胞Ca2+ 的流动不但参与调节 T、B 等免疫细胞的功能，同时也是细胞表面免疫受体胞内共有的 ITAM 和ITIM 发挥激活和抑制功能的主要元素。由于FcRs 发挥功 能是通过胞内ITAM 和ITIM 引起Ca2+ 的流动实现，而Ca2+ 的流动本 身可能是影响DCs 分化成熟的重要环节。因此，探索STIM1 和STIM2 在FcRs 调控DCs 分化成熟中的作用对阐明DCs 的免疫调节机制， 1 发掘DCs 调控免疫反应的靶点有重要的科学意义。 目的： 通过探讨STIM1 及STIM2 在FcR 调控树突状细胞成熟中的作 用，阐明STIM1 和STIM2 在DCs 发挥免疫调节中的作用。 方法： 1. DCs 体外培养体系的建立 采用密度梯度离心法，分离人外周血单个核细胞（PBMC ）利用 单核细胞贴壁特性，获取单核细胞。采用重组人白细胞介素-4 （rhIL-4 ） 100ng/mL 联合重组人粒细胞集落刺激因子（rhGM-CSF ）100ng/mL 刺激 6 天收获未成熟DCs （iDCs ）；第6 天加入脂多糖（LPS ）1μg/mL 刺激24h 后收获成熟DCs （mDCs ）。采用倒置相差显微镜观察DCs 形态学变化，流式细胞仪鉴定DCs 表型。 2. 激活FcR 受体对STIM1 和STIM2 表达的影响 流式细胞仪和免疫荧光检测DCs 表面激活型受体FcγRIIa 和抑制 型受体FcγRIIb 的表达；Real-time PCR 和Western-Bolt 检测iDCs 和 mDCs 中STIM1 和STIM2 的表达差异；分别采用IV.3 和7.3 与 F(ab’)2 结合形成免疫复合物，分别交联DCs 表面激活型和抑制型FcγR 后， 使用Real-time PCR 和Western-Bolt 检