SUMO-1在肝纤维化发展相关信号通路中的调控影响.pdfVIP

摘要 摘要 fibrosis，HF)是一组常见的慢性肝疾病的临床表现和病 肝纤维化(hepatic 理学综合征。 在整个肝纤维化发生发展的过程中，肝脏细胞内许多基因发生异 常表达，并伴有发展为肝细胞癌的危险性增加。在肝组织发生纤维化过程中， stellate 肝星状细胞(hepaticcells，HSCs)的活化增殖可谓是一个重要环节，而 factor B)及其调控系统又是介导炎症反应的关键调节因子。 NF．r．_13(nuclearkappa 活化的HSCs内NF．rd3活性增强，导致炎性因子表达增加，放大肝脏炎症损 伤反应，进一步促进了HSCs的活化；与此同时，NF。rd3活性增强还可抑制 HSCs凋亡。 modifier)基 SUMO．1基因是小泛素相关修饰物(SUMO，small ubipuitin．1ike 因家族中的一员，SUMO．1通过共价连接修饰靶蛋白，并参与蛋白质问的相互作 用，调控细胞内靶蛋白分布及其功能。近年来的研究显示，SUMO参与了NF-KB 信号通路的调节，该通路中重要的蛋白因子如Ir,Bot、NEMO均可被SUMO化修 饰；并且SUMO化修饰酶还可通过作为构架蛋白与一些蛋白直接相互作用从而 调控NF．r．B信号通路。因此，如能探究SUMO．1在肝纤维化进展过程中的作用 及其在NF．rd3信号通路的调控作用，那么通过抑制SUMO．1对NF．rd3信号通 路的修饰激活将对减少HSCs活化，促进HSCs凋亡等将有着极为重要的意义， 也可能对肝纤维化乃至肝癌的治疗策略将产生积极影响。 第一部分肝纤维化模型大鼠肝脏中SUMO．1及P65的表达变化 目的： 探讨肝纤维化模型大鼠肝脏中SUMO．1及P65的表达情况 模组给予40％CCl431xL／g四肢皮下注射，每周两次，在同时间点对照组予同等量 生理盐水四肢皮下注射；于造模后4、8、12周末断颈处死大鼠，每次处死大鼠 造模组(n=6)和对照组(n=4)，留取肝组织；造模期间观察大鼠一般情况。采用 苏木精一伊红染色(HE染色)观察各组大鼠肝组织病理改变，免疫组化对SUMO一1 time—PCR检测SUMO-1mRNA的表 表达进行定位及观察其相对量的变化，Real 达，Westem blot检测SUMO．1及p65蛋白水平。 摘要 结果：随着造模周期的延长，HE染色可见大鼠肝细胞变性至肝纤维化的形 成，免疫组化可见SUMO．1在肝纤维化大鼠模型肝脏中表达且随着时间推移表 达趋势逐渐增强。Realtime．PCR显示SUMO．1mRNA表达逐渐增强，各组差异 具有统计学意义(PO．05)。Western blot验证SUMO．1、p65表达逐渐增强，各 组间差异具有统计学意义(尸O．05)。 结论： 随着大鼠肝纤维化的形成SUMO一1及p65表达逐渐增高，二者可能 在肝纤维变化过程中有重要作用，同时NF．1(B信号通路活性的变化可能和 SUMO．1的表达水平有关。 ， 第二部分SUMO．1在大鼠肝纤维化相关NF．KB信号通路中的调控作用 目的： 初步探讨SUMO．1在NF．1cB信号通路的调控作用 方法：将人工合成的针对SUMO．1基因的siIⅢA慢病毒、SUMO．1过表 time．PCR、Westem 达慢病毒载体转染肝星状细胞，采用Real blot方法检测转染 后肝星状细胞中SUMO．1的表达状况，并采用Westernblot方法检测转染各载体 后肝星状细胞后P65在蛋白水平的变化。 结果：人工合成的针对SUMO．1基因的siRNA慢病毒能抑制肝星状细胞中