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选修三应重点掌握词句 《现代生物科技专题》应掌握的词句 1、限制性核酸内切酶：基因工程的剪刀，分子手术刀。具有特异性，只能识别特异序列，而且从特定位点的两个核苷酸之间的磷酸二酯键加以切割。切割后可能形成黏性末端或平末端。 2、DNA连接酶：基因工程的针线，分子缝合针，连接DNA双链片段，将骨架上的3，5—磷酸二酯键连接。 3、载体（运载体）：基因工程的运输工具。包括噬菌体、质粒、动植物病毒等。最常用的运载体是质粒,最常用的质粒为大肠杆菌质粒。载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存（以便提供大量的目的基因）②具有一至多个限制酶切点（供外源DNA片段插入）③具有标记基因（供重组DNA的鉴定和选择） 4、目的基因的获取：从供体细胞中分离、人工合成目的基因(反转录法_和化学合成法)、从基因文库（基因组文库，部分基因文库）中获取目的基因、PCR技术扩增。 5、基因表达载体的构建：基因工程的核心步骤，包括启动子、目的基因、终止子、标记基因、复制原点。构建基因表达载体的构建的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存在、遗传给下一代，而且使目的基因在受体细胞中表达和发挥作用。 6、将目的基因导入受体细胞：农杆菌转化法（最常用）、基因枪法(单子叶植物)、花粉管通道法（植物）；显微注射法（动物）；Ca2+处理使微生物细胞处于感受态。 7、目的基因检测和鉴定：DNA分子杂交法（检测目的基因是否整合到受体细胞基因组上）、分子杂交法（DNA-mRNA分子杂交法）（检测目的基因是否转录出mRNA）、抗原—抗体杂交法（检测目的基因是否翻译出蛋白质）、个体水平检测法观察生物是否表现出特定性状如病原体（虫）感染法 8、植物组织培养：理论基础是植物细胞的全能性，核心步骤是脱分化和再分化，离体的植物组织、器官、细胞脱分化会形成愈伤组织，在植物组织培养过程中需要加入生长素和细胞分裂素等植物激素，在再分化过程中愈伤组织的发育方向主要有细胞分裂素和生长素的比值决定，比值高形成芽，比值低形成根（愈伤组织的是向根和芽发育还是向胚状体发育取决于该比值）。要使高度分化的植物细胞恢复分裂能力应该采取离体、脱分化的措施。植物组织培养的应用是快速繁殖、提取药物、获得人工种子、培养无病毒植物（根尖和茎尖没有病毒。常用茎尖进行培养获得）等。 9、植物体细胞杂交：用酶解法（纤维素酶和果胶酶）去掉细胞壁，获得有活力的原生质体；原生质体融合（物理法如离心、振动、电刺激；化学法如聚乙二醇）；诱导出现新的细胞壁（质壁分离和复原法进行检查）；将杂种细胞培养成杂种植物。 10、动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、生产单克隆抗体等。 动物细胞培养：材料是动物的胚胎或者出生不久的幼龄动物的组织或器官，原理是细胞的增殖，工具酶是胰蛋白酶或胶原蛋白酶，需要首先将组织剪碎，然后放在培养液中制成细胞悬浮液进行培养。培养过程分为原代培养（两个特点贴壁生长、接触抑制）和传代培养（包括细胞株10-50、细胞系50代之后；目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为10代以内，以保持细胞正常的二倍体核型）。培养液包括葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清、血浆。动物细胞培养的条件有无菌无毒环境、温度（36.5±0.5）和pH（7.2-7.4）、营养和气体环境（95%空气+5%CO2，二氧化碳的作用是维持培养液的pH）。 11、动物细胞核移植：原理是动物细胞核的全能性，选择体细胞或者胚胎细胞的细胞核和去核卵母细胞的细胞质（减数第二次分裂中期的卵母细胞）重新组合，将重组细胞培养成完整个体或器官等。动物细胞核移植是克隆的一种。 12、动物细胞融合：方法是物理法（离心、振动、电刺激），化学法（聚乙二醇），生物法（灭活的病毒）；最主要的用途是制备单克隆抗体。 13、单克隆抗体技术：前提是动物细胞融合，首先给小鼠注射某种抗原找到能产生特定抗体的浆细胞（B细胞），将B细胞和骨髓瘤细胞通过动物细胞融合的方法融合成杂种细胞。内部细胞有五种，所以应该将其放在特定的选择培养基中筛选，选出杂交瘤细胞（既可以在体外培养条件下无限增殖 ，又能产生单一的抗体），杂交瘤细胞还需要进行抗体检测（抗原—抗体检测法）和克隆化培养，放在体外培养和体内培养（不需要特定培养基，不需严格外界环境条件），从中提取单克隆抗体。单克隆抗体最主要的优点在于它的特异性强、灵敏度高，并可能大量制备。 14、胚胎工程包括体外受精、早期胚胎培养、胚胎移植、胚胎分割、胚胎干细胞培养等技术。卵子是否受精的标志是：卵黄膜和透明带的间隙中观察到两个极体。 15、防止多精入卵的两道屏障；透明带反应、卵黄膜封闭作用。 16、胚胎发育过程：卵裂期（特点是细胞分裂方式为有丝分裂，细胞的数量不断增加，但胚胎的总体积并不增加，或略有缩小）→桑椹胚（全能细胞，每个细胞都有