降解水稻秸秆的复合菌系及其微生物群落结构演替-微生物分类权威.pdfVIP

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2016, 56(12): 1856-1868 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxb Research Paper 研究报告 降解水稻秸秆的复合菌系及其微生物群落结构演替 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 1,2 * 王春芳 ，马诗淳 ，黄艳 ，刘来雁 ，凡慧 ，邓宇 1 农业部沼气科学研究所，四川 成都 610041 2 农业部农村可再生能源开发利用重点实验室，四川 成都 610041 摘要： 【目的】比较和分析从堆肥中富集的水稻秸秆降解菌系F1和F2 的纤维素分解能力、微生物群落结 构及其在秸秆降解过程中的演替，从而探究微生物群落结构与秸秆降解效率的相关性。【方法】采用 DNS (3,5-二硝基水杨酸, 3,5-dinitrosalicylic acid)定糖法测定发酵液中的外切纤维素酶活；采用范氏(Van Soest)洗涤纤维分析法测定发酵前与发酵后的秸秆纤维素、半纤维素、木质素的含量，并计算降解率； 采用16S rRNA基因序列分析和实时荧光定量PCR (Quantitative real-time PCR, Q-PCR)对秸秆降解过程中 的微生物物种组成及特定的功能微生物进行定性和定量分析。【结果】复合菌系F1 的水稻秸秆总降解 率、纤维素降解率、半纤维素降解率显著高于复合菌系F2 ；2种复合菌系的外切纤维素酶活性与cel48基 因的拷贝数变化趋势一致；复合菌系F1 的物种较丰富，优势物种是好氧细菌，复合菌系F2 的物种组成较 单一，培养后期具有较高比例的厌氧纤维素分解菌；培养前4 天，复合菌系F1 和F2 的优势物种均为 Unclassified Bacillales和Bacillus ；第4天之后，不同复合菌系的优势物种及丰度出现差异，F1 的优势物种 主要属于Bacteroidetes ，F2 的优势物种主要属于Firmicutes ；虽然Petrimonas 和Pusillimonas是培养后期的 共有优势物种，但是Petrimonas在复合菌系F2 中的相对丰度(38.30%)显著高于F1(9.47%) ，且培养第8天的 F2 中的Clostridiales OPB54增加至14.85%。【结论】cel48基因拷贝数变化与秸秆纤维素的降解效率、外 切纤维素酶活性变化具有一定的相关性，cel48基因可作为潜在的生物分子标记监测秸秆纤维素的降解过 程；微生物群落结构对秸秆纤维素的降解效率具有显著影响，Unclassified Bacillales, Bacillus, Petrimonas, Pusillimonas是复合菌系F1和F2降解秸秆纤维素过程中的重要物种。 关键词：水稻秸秆, 外切纤维素酶, 降解率, 微生物群落 基金项目：国家863计划(2013AA102805-02) ；四川省科技计划项目(2012GZ0003 ，2014NZ0045) ；四川省应用基础研究计划项 目(2013JY0006) *通信作者。Tel ：+86-28；E-mail ：dengyu@ 收稿日期：2016-03-08 ；修回日期：2016-05-10 ；网络出版日期：2016-05-13 王春芳等 | 微生物学报, 2016, 56(12) 1857 秸秆纤维素的水解效率是秸秆资源化利用的 用、构建高效稳定降解水稻秸秆的复合菌系提供 关键技术瓶颈。针对这一问题，国内外科学家不 参考。 断探索和优化新的纤维素转化和利用技术，其中 采用生物技术实现秸秆纤维素的高效转化一直是 1 材料和方法 [ 1] 近二十年来的研究重点 。自上世纪开始，科学 家从自然界中筛选获得了大量的纤维素分解菌， 1.1 材料 其中Clostridium therm