利用TALEN技术建立恒河猴TRIM5α基因突变细胞株-生物技术通报.PDF

生物技术通报 ·技术与方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 12 :53-57 利用 TALEN 技术建立恒河猴 TRIM5α基因 突变细胞株 1，2 2 1，2 3 2 1 王小莉   余庆  袁雅红   腾智平  李东升  曾毅 （1. 北京工业大学生命科学与生物工程学院，北京 100124 ；2. 湖北医药学院附属太和医院生命科学研究所，十堰 442000 ； 3. 中国预防医学科学院病毒所，北京 100052） 摘 要 ： 利用TALEN 技术建立恒河猴TRIM5α 基因突变细胞株，为进一步研究TRIM5α 基因的功能奠定基础。构建针对 TRIM5α 打靶基因的TALEN，通过点突变的方法获得包含TRIM5α 第7 个外显子中打靶位点1 211-1 224 的基因序列并构建点突变 donor 载体。将打靶TRIM5α 基因的TALEN 质粒和donor 质粒电转入恒河猴肾细胞 （LLC-MK2） 中，无限稀释法获得单克隆细胞系， 通过抽提基因组DNA，再利用PCR 技术扩增目标序列并测序筛选出TRIM5α 碱基缺失 （1 215-1 216）和点突变 （1 213-1 215， 1 217）的细胞系。通过共转TALEN 质粒和点突变的donor 质粒筛选获得了TRIM5α 基因敲除和TRIM5α 基因点突变的LLC-MK2 细 胞系。 关键词 ： TRIM5α ；TALEN ；恒河猴 ；点突变 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.12.010 Establishment of Mutagenesis Cell Line of Macaca mulatta Gene TRIM5α by TALEN 1，2 2 1，2 3 2 1 WANG Xiao-li YU Qing YUAN Ya-hong TENG Zhi-ping LI Dong-sheng ZENG Yi （1. College of Life Sciences ，Beijing University of Technology ，Beijing 100124 ；2. Life Science Institute ，Affiliated Taihe Hospital ，Hubei University of Medicine，Shiyan 442000 ；3. Institute of Virology ，Chinese Academy of Preventive Medicine ，Beijing 100052 ） Abstract: Using transcription activator-like effector nuclease（TALEN）to establish the mutagenesis cell line of Macaca mulatta gene TRIM5α is to lay the foundation for further studying the function of TRIM5α gene. The TALEN plasmid