分子技术模板试卷.docVIP

博士班《分子生物学实验技术课》模拟试卷 1、你想采用PCR技术扩增pEGFP-N1中绿荧光蛋白（GFP）的序列，通过基因A中的BamH1位点将GFP序列插入基因A的编码序列中，并保证全长融合蛋白的表达。请根据下列信息设计用于扩增GFP的引物。 A． B． …..GCCAGTGGGATCCTGATTGCC….. Ala Ser Gly Ilu Arg Ilu Ala GGATCC为BamH1位点 你在做一个DNA连接反应。经酶切回收的质粒载体大小为5055 bp、1:50稀释后测OD260＝0.2；插入DNA片段大小为675 bp、1:40稀释后测OD260＝0.1。请按载体DNA与插入DNA片段克分子数比为1:3和载体DNA总量约0.15 x 10-12 mole计算，完成下列工作表（每个的平均分子量330计）： 10x Buffer Vector DNA Insert DNA H2O T4 ligase Total Volume 2 (l (l (l (l 1 (l 20 (l 3、下图是一个质粒图谱，标明其主要构件和作用。并根据构建特征，指出该载体的类型和功能特征。 提示：pIRES-EGFP contains the internal ribosome entry site (IRES) of the encephalomyocarditis virus (ECMV) between the MCS and the EGFP (enhanced green fluorescent protein) coding region. This permits both the gene of interest (cloned into the MCS) and the EGFP gene to be translated from a single bicistronic mRNA. 你从大鼠脑组织中克隆了一个新基因，并已知是一种膜蛋白，根据cDNA序列得知氨基酸残基为882个，同时你已制备了特异性单克隆抗体。下图分别是针对原核细胞表达产物、真核细胞表达产物和大鼠组织样本的免疫印迹结果： 请解释结果，并设计实验来验证你的判断。 SARS病毒全基因组测序和相关蛋白的鉴定已完成。你想利用pETBlue-2载体表达SARS棘蛋白（surface spike glycoprotein）作进一步研究。 你已有SARS病毒RNA、原核表达载体pETBlue-2、其他相关试剂和实验设备；并知道以下相关信息如下： ①SARS棘蛋白的编码序列（下列为SARS基因组部分序列，棘蛋白序列从21492到25259 bp）： 21421 gtaggcttat cattagagaa aacaacagag ttgtggtttc aagtgatatt cttgttaaca 21481 actaaacgaa catgtttatt ttcttattat ttcttactct cactagtggt agtgaccttg 21541 accggtgcac cacttttgat gatgttcaag ctcctaatta cactcaacat acttcatcta 21601 tgaggggggt ttactatcct gatgaaattt ttagatcaga cactctttat ttaactcagg 21661 atttatttct tccattttat tctaatgtta cagggtttca tactattaat catacgtttg 21721 gcaaccctgt catacctttt aaggatggta tttattttgc tgccacagag aaatcaaatg 21781 ttgtccgtgg ttgggttttt ggttctacca tgaacaacaa gtcacagtcg gtgattatta 21841 ttaacaattc tactaatgtt gttatacgag catgtaactt tgaattgtgt gacaaccctt 21901 tctttgctgt ttctaaaccc atgggtacac agacacatac tatgatattc gataatgcat 21961 ttaattgcac tttcgagtac atatctgatg ccttttcgct tgatgtttca gaaaagtcag 22021 gtaattttaa acacttacga gagtttgtgt ttaaaaataa agatgggttt ct