蛋白质复性技术研究进展.PDFVIP

《生物工程进展》2002 ,Vol . 22 ,No . 2 蛋白质复性技术研究进展 王 　颖 　董晓燕 　孙 　彦 (天津大学化工学院生物工程系 　天津 　300072) 摘要 　评述了蛋白质复性研究的科学背景及蛋白质折叠机制的研究现状 ,详细介绍近年来蛋白质 复性技术的研究进展 ,包括稀释添加技术和各种辅助因子的作用 、固定化辅助因子应用 、尺寸排阻 色谱和固定化辅助因子色谱等 。 关键词 　蛋白质 　复性 　稀释添加剂 　色谱 　　基因工程技术的蓬勃发展掀开了人类生命科学 叠的决定性因素还有待证实 。Rariy 等[7 ] 的研究表 ( ) 研究的崭新篇章 , 同时也开辟了现代生物工业发展 明 ,在高浓度有机相中 如 99 %的甘油中 蛋白质也 的新纪元 。但是 ,很多利用大肠杆菌为宿主细胞的 可从松散的肽链折叠成有活性的高级结构 。Hagen ( [8 ] 外源基因表达产物 如尿激酶 、人胰岛素 、人生长激 等 利用反胶团萃取复性牛胰凝乳核糖核酸酶 A ) 素 、白细胞介素等 不仅不能分泌到细胞外 ,而且在 亦获得一定的复性效果 。上述两例蛋白质的复性条 ( ) 细胞内凝聚成没有生物活性的固体颗粒 ———包含体 件均是疏水性环境 反胶团内水相疏水性较高 ,若 (inclusion bodies) 。为此 ,欲获得天然活性态的目标 依疏水作用而言 ,变性蛋白质暴露在外侧的疏水基 产物 ,必须分离回收包含体后 ,利用脲或盐酸胍等变 团在疏水性环境中应是稳定的。那么 ,什么作用促 性剂溶解包含体 ,再进行适宜的复性操作 。近年来 , 成蛋白质的折叠就无法用上述假设来解释了。 蛋白质复性技术研 究呈 多元化 的趋 势 , 发展迅 Baker[9 ] 提出蛋 白质折叠是 由其拓扑学性质决 速[ 1～5 ] 。本文在评述蛋白质复性机制的基础上 ,综 定的 ,这是“整体观”的研究思路 。在无数空间结构 述近年来蛋白质复性的研究进展和发展动态 。 中 ,具有生理活性的蛋白质结构是唯一的 ,并且此拓 扑结构的熵值最小 。熵是度量系统无序度的函数 , 1 　蛋白质复性机制 蛋白质的折叠过程是一个熵值不断减小 、从无序的 自1959 年 Kauzwanm 首次提 出“疏水作用”以 松散肽链到有序的活性蛋白质结构的演变过程 。因 来 ,人们采取多种手段及方法研究疏水作用与蛋白 此 ,如何根据“熵”解释蛋白质折叠也许会成为今后 质折叠之间的关系 。由于生物体内的蛋白质处于水 学者们探讨蛋白质折叠机制问题的一个崭新视角 。 相环境中 ,蛋白质亲水基团暴露在外侧 ,而疏水基团 具有一定二级结构的松散肽链折叠成活性蛋白 出于避开水的需要而被迫接近被包埋的蛋白质立体 质并不是一步完成的 ,而是经历了伸展态或不完全 结构内部 。此时 ,蛋白质结构可以看作为亲水疏水 伸展态 、熔球态等各种结构的中间态到天然态的转 作用之间的平衡 。针对疏水作用在蛋白质三级结构 变 。Gorovits[ 10 ] 等在研究硫氰酸酶复性方法时 ,建立 上所占的突出地位和对蛋白质稳定性的重要影响 ,