化疗介导肾癌细胞免疫原性表达变化的体外探究.pdfVIP

摘 要 摘 要 目的 探讨化疗药物吉西他滨（GMC ）和5-氟尿嘧啶(5-FU)对肾透明细胞癌细胞株786-0 细胞膜表面钙网蛋白（calreticulin,CRT ）表达的影响，寻找药物合适的浓度使钙网蛋白 有效的表达，为协同肾癌的生物免疫治疗发挥作用，提供实验数据，强化理论支持，为 寻找肾癌治疗的方法提供新思路。 方法 用 CCK-8 法检测观察 GMC 和 5-FU 对 786-0 细胞的生长抑制作用；用流式细胞仪 检测不同浓度 GMC 和 5-FU 对 786-0 细胞膜表面CRT的表达。 结果 1. CCK-8 检测结果：随着这两种药物剂量的加大，其对细胞增殖的抑制率也越来 越大，吉西他滨 24h 的IC50 为 1.2 ug/ml，5-氟尿嘧啶24h 的IC50 为 40ug/ml. 2. 在786-0细胞孔中加入0.01mol/L PBS、1.2ug/ml GMC、40ug/ml 5-FU ，用流式细 胞仪给予检测786-0细胞表面CRT表达的量，PBS组的平均荧光强度为：59.22±3.27；GMC 组的平均荧光强度为：179.21±13.22；5-FU组的平均荧光强度为：145.6±8.23。吉西他滨 和5-氟尿嘧啶两种药物均能够诱导细胞膜上的钙网蛋白表达增多。这两药物组分别与对 照组相比，都有显著的差异性（P＜0.01 ）。吉西他滨对其表达的影响为强，5-氟尿嘧啶 较弱。 3. 吉西他滨和5氟尿嘧啶在不同浓度对 786-0 细胞膜表面CRT表达的影响：①吉 西他滨浓度的不断增加，细胞膜上表达的CRT的平均荧光强度也不断增高，但当浓度达 到 8×IC50 时，其增高的幅度不再明显增加。②5-氟尿嘧啶浓度的不断增加，细胞膜上 表达的CRT的平均荧光强度也不断增高，但当浓度达到 8× IC50 时，其增高的幅度不再 明显增加。经过统计学分析，GMC 组和 5-FU 组分别与PBS对照组比较有显著性差异 （P ＜0.01 ）；GMC 组和 5-FU 组相比较，也有显著性差异（P＜0.01 ）。两种药物各浓度组 间两两比较，GMC ：4×IC50 与 8×IC50 组间无明显统计学差异 （t=0.676 ，P=0.8760.05 ） , 其余各浓度组之间相比较，均有显著性差异（P＜0.01）。5-FU：4×IC50与8×IC50 组间无明显统计学差异（t= -1.308 ，P=0.1870.05 ）, 其余各浓度组之间相比较，均有 显著性差异（P＜0.01 ）。 I 摘 要 结论 通过本次研究，用不同浓度的吉西他滨和5氟尿嘧啶处理肾透明细胞株786-0细胞， 应用流式细胞检测技术检测该细胞膜表面的钙网蛋白表达的情况，寻找致使细胞膜表面 钙网蛋白高表达的浓度，探讨化疗联合生物免疫治疗方法及剂量，总结如下结论。 1、吉西他滨和5-氟尿嘧啶都能促使786-0细胞膜表面钙网蛋白表达增多，从而诱导 肿瘤细胞的免疫原性死亡。在化疗联合生物免疫治疗对肾癌的治疗中有重要意义。 2 、不同浓度的吉西他滨和5-氟尿嘧啶对钙网蛋白在细胞膜表面的表达的量不同， 两种药物在较低浓度时对钙网蛋白在细胞膜的表达有明显的促进效应，因此，为诱导肿 瘤细胞免疫原性死亡，使用较低剂量化疗药物是可能适宜的。 关键词 吉西他滨（GMC） 5-氟尿嘧啶（5-FU ） 钙网蛋白（CRT ） 免疫原性 786-0 细胞 肾癌细胞 II Abstract Abstract Objective To investigate the immunogenicity associated pro