高温烹调食品中杂环胺类物质的测定.docVIP

食品安全国家标准 高温烹调食品中杂环胺类物质的测定 范围 本标准规定了高温烹调食品中5种杂环胺2－氨基－3,8－二甲基咪唑并[4,5-f]喹啉（MeIQx）， 2－氨基－3,4－二甲基咪唑并[4,5-f]喹啉（MeIQ），2－氨基－3,7,8－三甲基咪唑并[4,5-f]喹啉（7,8-DiMeIQx），2－氨基－3,4,8－三甲基咪唑并[4,5-f]喹啉（4,8-DiMeIQx），2-氨基－1－甲基－6－苯基－咪唑并[4,5-b]吡啶（PhIP）的液相色谱－质谱/质谱测定方法。 本标准适用于氢氧化钠/甲醇溶液提取，固相萃取柱化 试剂和材料 注：除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 试剂 乙酸（CH3COOH）：色谱纯。 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 甲醇（CH3OH）：色谱纯。 乙醇（CH3CH2OH）：色谱纯。 正己烷（CH3(CH2)4CH3）：色谱纯。 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。 氢氧化钠（NaOH）。 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。 试剂配制 氢氧化钠溶液（40 g/L）：称取40.0 g 氢氧化钠，加水溶解，定容至1000 mL。 甲醇氢氧化钠溶液3+7）：取40 g/L氢氧化钠溶液70 mL，加入30 mL 甲醇混匀。 氢氧化钠溶液(4 g/L)：取40 g/L氢氧化钠溶液50 mL，加入450 mL水混匀。 甲醇氢氧化钠溶液（55+45）：量取4 g/L氢氧化钠溶液45mL，加入55 mL甲醇混匀。 乙醇正己烷溶液（20+80）：量取20 mL乙醇和80 mL 正己烷混匀。 乙醇二氯甲烷溶液（10+90）：量取10 mL乙醇和90 mL 二氯甲烷混匀。 乙腈-水溶液（5+95）：量取5 mL乙腈，加95 mL水混合均匀。 乙酸乙酸铵缓冲液：准确称取色谱纯乙酸铵1.155 g，用移液枪吸取860 (L色谱纯乙酸，加超纯水500 mL，摇匀，用乙酸调pH值为4.75。 标准品 五种杂环胺标准品（C11H11N5、C12H12N4、C12H13N5、C12H13N5、C13H12N4） 内标（C13H15N5）标准物质和内标详细信息见附录A。 标准溶液配制 五种杂环胺储备液（10.0 ?g/mL）：分别准确称取5种待测杂环胺标准品1.0 mg，用色谱纯甲醇定容至100 mL。 内标储备液（10.0 ?g/mL）：准确称取内标（4,7,8-TriMeIQx）1.0 mg，用色谱纯甲醇定容至100mL。 内标标准曲线工作液：吸取五种杂环胺标准储备液及内标储备液用乙腈-水溶液（5+95）?g/L、1.0 ?g/L、2.0 ?g/L、5.0 ?g/L、10.0 ?g/L、20.0 ?g/L，内标浓度为10?g/L的混合标准溶液。 内标工作液（0.1 ?g/mL）：吸取适量内标储备液用甲醇稀释至0.1 ?g/mL。 仪器与设备 液相色谱仪质谱仪天平0.1 mg 和1 mg 。 pH计：感量为0.01。 超声波清洗机。 冷冻离心机（-20℃~40℃，21000 r/min）。 氮气吹干仪。 去离子水发生器。 固相萃取装置。 均质器。 4.10旋涡振荡器。 4.11有机相型微孔滤膜：孔径0.2 (m。 Lichrolut EN固相萃取柱。 分析步骤 试样制备 预处理：称取食品（肉制品、水产品）样本1.0 g于50 mL离心管中，加入内标工作液100 μL，再加入10 mL甲醇氢氧化钠溶液3+7），用均质器均质2次，每次20 s。 提取：将均质后的样品在旋涡振荡器上充分混合1 min后，置于超声波清洗机中，室温下超声提取5 min。取出离心管，冷冻（-4℃）离心10 min（10000 r/min）。 净化：将固相萃取柱预先依次用2 mL甲醇、3 mL 4 g/L氢氧化钠溶液mL甲醇-4 g/L氢氧化钠溶液乙醇正己烷溶液20+80）洗2次，每次用1 mL；3 mL甲醇-4 g/L氢氧化钠溶液1 min）；最后用乙醇二氯甲烷溶液（1090）mL，控制洗脱流速小于1 mL/min，收集洗脱液，并在35℃水浴下用氮气吹干，加入500 (L乙酸-乙酸铵缓冲液涡旋溶解，用乙腈定容至1 mL，最后用微孔滤膜（0.2 (m）过滤，待上机分析测定。 5.1仪器参考条件 液相色谱条件 色谱柱： XUnion C18柱，柱长100 mm，内径2.1 mm，粒径2.5 ?m或BEH C18柱，柱长100 mm，内径2.1 mm，粒径1.7 ?m，或同等性能的色谱柱。流动相：A-30 mmol/L乙酸/乙酸铵(pH 4.75)，B-乙腈。流速：0.3 mL/min。柱温：40℃。样品室温度：4℃。进样量：5 ?L。 梯度洗脱程序参见附录B。 质谱条件 电离方式：电喷雾电离正离子模式（ESI+）。