生物技术制药 第二章 发酵工程.ppt

第二章  发酵工程制药  第一节 概述 一、发酵工程 微生物工程:自催化过程 完整的工业体系 三、微生物发酵生产药物的分类 （一）抗生素类 9000种 微生物发酵占70％。有价值的抗生素，几乎全部由微生物生产 抗细菌，病毒，真菌，肿瘤，原虫，寄生虫等 （二）氨基酸类 单个氨基酸制剂： 复方氨基酸制剂： 微生物发酵法： 酶转化法 （三）核苷酸类 肌苷酸，肌苷，AMP，ATP，辅酶等 （四）维生素类 维生素C的原料药2-酮基-古龙酸，维生素A的前体B-类胡萝卜素，维生素D2的前体麦角甾醇，维生素B2，B12等 （四）甾体类激素 甾体类激素的生产过程中，一些特异反应需借助微生物的反应。 （五）治疗酶及酶抑制剂 药用酶 酶抑制剂 四、发酵工程制药特点及发展趋势 （1）菌种是根本 （2）理论产量存在“生物学变量” （3）常温常压下反应，安全，条件简单 （4）纯种培养，防污染 （5）可制备复杂高分子化合物 （6）分子水平，定向发酵，组合生物合成等 （7）发酵工业成本低 第二节、发酵工程中的微生物 一、常见的药用微生物 发酵工程所利用的微生物主要是细菌、放线菌，酵母菌和霉菌 （一）细菌 主要生产氨基酸，核苷酸，维生素等 （二）放线菌 产抗生素最多的一类微生物 另外生产B12,酶，甾体转化 抗生素是次级代谢产物，需要生物体进行复杂的代谢，目前发现的生物来源如下： （三）真菌 抗生素 维生素 酶制剂 有机酸等 药用真菌（大型真菌） 1.藻状菌纲：根霉；犁头霉 2.子囊菌纲：酵母 3.担子菌纲：牛肝菌，灵芝 4.半知菌纲：曲霉；青霉；头孢酶 二、生产菌种的选育 工业化菌种的要求 1.遗传性能要相对稳定 2.生长速度快，不易感染它种微生物或噬菌体 3.目标产物产量接近理论转化值 4.目标产物分泌到胞外 5.尽可能减少类似物产量 6.能够利用廉价的原料，简单的培养基，大量高效地合成产物 （2)自发突变与定向育种 一定情况下，长期处理微生物并移种，累积自发突变体 结构类似物：在化学和空间结构上和代谢的中间物（终产物）相似，因而在代谢调节方面可以代替代谢中间物（终产物）的功能，但细胞不能以其作为自身的营养物质。 筛选抗性株，可成为高产株 抗性突变株的筛选 （4）杂交育种 通过有性生殖进行 (5)原生质体融合 两个细胞融合 1.原生质体融合的一般程序 　　去细胞壁　　　融合　　　筛选　 2.酶 溶菌酶，纤维素酶，蜗牛酶 筛选 从产物形成的生理生化途径着手，进行有的放矢的筛选。如结构类似物抗性、营养缺陷型等，筛选而产生的这些特性，称为遗传标记。 1.自身耐药突变株 2.结构类似物或前体类似物的耐受突变株 3.营养缺陷及其回复突变株 三、菌种保藏 在生产发酵中，具有高产有重要经济价值的某一期待代谢产物主能力的微生物菌种的保存和长期保藏，对于一成功的工业发酵过程极为重要。 斜面低温法：短期保存 石蜡油封存法：中期保存 沙土管：产孢子和芽孢的 麸皮保存法：产孢子的霉菌和放线菌，工厂用 甘油悬液法：基因工程菌 冻干保藏 ：最广泛使用的方法。大部分菌种可以在冻干状态下保藏10年之久。且经冻干后的菌株无需进行冷冻保藏，便于运输 液氮法：最为有效，保藏15年以上， 宿主保藏法：活细胞内寄生的微生物 第三节、发酵设备及消毒灭菌 一、发酵设备 1、搅拌釜式反应器：目前使用最广泛的发酵反应器 （二）发酵辅助设备 无菌空气系统：过滤除菌（使用活性炭，石棉滤板，多孔合成树脂等） 灭菌系统 发酵车间的管道阀门等 发酵对无菌空气的要求是 ：无菌，无灰尘，无杂质，无水，无油，正压等几项指标； 发酵对无菌空气的无菌程度要求是：只要在发酵过程中不因无菌空气染菌，而造成损失即可。 在工程设计中一般要求1000次使用周期中只允许有一个菌通过，即经过滤后空气的无菌程度为N=10-3 高空取气管是远离地面几十米的管子。 地面附近空气中所含的微生物和灰尘等均比高空空气中含的多，每升高10米，空气中杂菌可降低一个数量级 因此从高空取气要比从低空取气有利得多。 油水分离器 其内部同时采用直接拦截，惯性碰撞，布朗扩散及凝聚等机理，能有效地去除空气中的水、油雾、尘埃，内部不锈钢丝网可清洗，使用寿命长。 二、培养基和灭菌 （一）培养基 C源： N源： 无机盐： 前体，促进剂，抑制剂 2.培养基的类型 孢子培养基：一般用固体培养基，N源不能丰富如：小米或麸皮培养基 种子培养基：速效的C,N源，与发酵培养基过渡 发酵培养基：迟效与速效的C,N源搭配，加前体等 （二）灭菌方法 1.空罐灭菌：高压水蒸气，消灭死角 当培养基（或物料）尚未进罐前对罐进行预先灭菌 2.实罐灭菌：效果最好，121度，30-50分钟 三路进汽：直接蒸汽从通风、取样和出料口进入罐内