肝癌多光子光学诊断和肝移植术后索拉菲尼早期干预的实验研究.pdfVIP

肝癌多光子光学诊断及肝移植术后索拉菲尼早期干预的实验研究 中文摘要 当前肝癌发病率我国居世界第一，癌症死因中肝癌在我国居第二，在全球居 第三。尽管近半个世纪肝癌临床与基础研究有了不少进展，但肝癌总的预后仍差， 诊疗水平仍有待于进一步提高。 肝癌诊断，病理组织学诊断仍然是金标准。对于影像学及血清学诊断不清的 病例，如甲胎蛋白阴性的占位性病变的诊断、肝良性结节与恶性结节的鉴别以及 可疑肺转移结节的定性，都离不开病理活检。但传统病理活检，需要取材及随后 的组织固定、包埋、切片、染色等步骤。同时，随着肝癌预后的不同，肝癌诊断 目前已开始由单纯病理组织形态学诊断转向“病理．生物学”诊断的新阶段。诊 断的核心，不仅仅是描述肝癌的特异性，而且是推断肝癌的生物学特性，即不仅 仅回答肝癌的“是与否”，还需要判断肝癌的“好与坏”。传统的单纯病理组织形 态学已不能满足上述需求。基于非线性光学和飞秒激光镭射之上的多光子光学诊 断，通过利用活体组织中细胞本身产生的自体荧光及胶原组织产生的第二谐波， 可以实时快速地获得组织及细胞的组织学特征，无需传统病理活检的组织切取、 固定、包埋、切片、染色等步骤，是一种实时快速的诊断方法。细胞本身产生的 自体荧光来自细胞内的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)及黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD)。多光子光学诊断不仅可以捕获组织学特征，而且可以反映细胞代谢水平， 其优点是实时、快速、便捷，同时又实现“形态”与“功能”的统一。由于目前 尚无肝癌的多光子光学诊断的研究，因此本课题对此进行了探索。 肝癌治疗，目前仍是以手术为主的综合治疗。手术，包括肝切除及肝移植， 是肝癌患者获得长期生存的最重要手段。在我国，85％的肝细胞癌伴有乙型肝炎 肝硬化。肝移植，对于肝硬化基础上的肝癌，既切除了肿瘤，又去除了肝硬化， 一举两得。然而，移植术后易复发及转移，这是影响疗效及导致患者死亡的主要 原因。既往的研究表明化疗、放疗、介入栓塞治疗等均无法抑制肝移植术后肿瘤 复发及转移。因此，如何减少肝移植术后复发及转移，是当前研究的热点及难点。 索拉菲尼，作为一种多激酶抑制剂，可以抑制RAF激酶活性，从而抑制 而阻断肿瘤新生血管的形成，诱导肿瘤细胞凋亡。临床试验证实索拉菲尼可延长 进展期肝癌的生存时间，美国FDA2007年批准索拉菲尼用于晚期肝癌的治疗，但 是，目前临床上尚未应用索拉菲尼作为肝移植术后的辅助治疗。肝移植术后索拉 菲尼早期干预能否抑制肿瘤的复发与转移，从而延长患者生存时间，有待于探讨。 基于肝癌诊疗中的上述问题，本课题进行了肝癌多光子光学诊断及肝移植术 后索拉菲尼早期干预的实验研究。研究发现：1、肝癌的多光子光学诊断是可行 的，既可诊断肝癌及肺转移灶、鉴别肝脏良恶性结节，又可区别肝癌细胞和正常 细胞不同的代谢水平，并进行光学“连续切片”；2、索拉菲尼可以显著减少肝癌 循环血肿瘤细胞的数量，抑制肝癌血行转移；3、肝移植术后早期应用索拉菲尼 可以抑制肝癌复发与转移，从而延长生存时间。具体见以下三部分： 第一部分肝癌多光子光学诊断的实验研究 【背景与目的】肝结节及可疑肺转移结节的活检存在出血、胆漏或气胸、针道转 移、病理流程费时等缺点。基于非线性光学和飞秒激光镭射之上的多光子光学成 像，通过利用活体组织中细胞本身产生的自体荧光及胶原组织产生的第二谐波， 可以实时快速地获得组织及细胞的病理组织学特征，本节研究肝癌多光子光学诊 断的可行性。 【方法】首先，6只原位肝癌(MorrisHepatoma)大鼠模型的新鲜肝肺标本经多 光子扫描成像，成像后标本经10％福尔马林固定、石蜡包埋、组织切片、苏木素 一伊红(卜E)染色，多光子光学图片与H-E图片进行病理组织学比较：其次，60 例肝切除手术新鲜标本，包括肝细胞癌、胆管细胞癌、转移癌、血管瘤、肝腺瘤、 肝局灶性结节增生、肝硬化结节等，接收多光子扫描成像及常规病理取材、固定、 包埋、切片、H-E染色，多光子光学图片与H-E图片进行组织形态学比较，建立 多光子光学诊断标准：最后，164例组织库肝标本接受“盲法”检测，评价多光 子光学诊断的敏感性、特异性、准确性。 【结果】在大鼠肝癌模型中，多光子显微成像可以清晰地显示肝癌及其肺转移灶 的组织结构和细胞形态，如癌细胞及其细胞核的异型性，癌细胞形态和大小不一、 细胞核增大、核浆比失调等，同时，还可以进行光学“连续切片”；在60例肝切 除标本中，根据肿瘤实质中的自体荧光和问质中胶原产生的第二谐波的差异，多 光子显微