肝癌组织中肿瘤相关巨噬细胞的鉴定和其药物干预.pdfVIP

复旦大学博士论文 中文摘要 中文摘要 第三大肿瘤相关死亡的病因【1，2】．。尽管外科手术和肝移植为肝癌提供了有效的治疗 生在术后两年以内，这些导致了肝癌患者的预后仍然很差【3】。人们一直以来都认为肝 癌复发和转移主要和肿瘤细胞本身的生物学特性有关。近些年的研究发现，肿瘤细胞 并不是孤立存在，而是处在一个包括炎症免疫细胞、基质细胞、血管内皮细胞、细胞 因子、趋化因子等共同组成的复杂环境之中，这种微观环境被称为“肿瘤微环境”【4】。 “炎症破坏．组织修复”的恶性循环促进肿瘤发生发展的重要原因【5】。临床上大部分肝癌 患者有乙型或(和)丙型肝炎肝硬化背景。炎症和肝硬化导致的细胞增殖异常可以促 进肿瘤的演进和进展【6】。因此，肿瘤的免疫微环境在肝癌的侵袭和转移过程中发挥着 重要作用。 associated 肿瘤相关巨噬细胞(tumor 环境中的炎症细胞的重要成分。它们的主要特点是诱导宿主免疫抑制，刺激血管生成， 分泌肿瘤生长因子和诱导II型炎症反应【7】。TAMs被认为是替代途径激活的巨噬细胞 activated (alternatively 究多利用泛巨噬细胞标志物(pan．macrophage 织中的TAMs[9—11】。由于肿瘤组织中浸润的巨噬细胞是由多种不同的巨噬细胞亚群 组成，各自在不同的微解剖位置发挥不同甚至相反的作用。因此寻找更加特异的标志 物对于识别肝癌组织中TAMs并探索其功能具有重要的意义。 由于肝癌细胞本身及肝硬化环境等原因，至今临床上对肝癌治疗有效的药物很少。 sorafenib作为酪氨酸激酶受体抑制剂，可以通过抑制肝癌组织中的血管内皮生长因 factor endothelial 子受体(vascular growth derived factor 子受体(plateletgrowth 3】。 疗药物【12】。临床实验证明，sorafenib可以使晚期肝癌患者生存期提高3．8个月【1 我所(复旦大学肝癌研究所)利用自主建立的人肝癌裸鼠模型筛选药物发现a干扰素 效预防肝癌患者术后的复发与转移【15】。即便如此，两种药物对肝癌的疗效仍不满意。 治疗可能促进肝癌组织的血管生成的恶性反弹及肿瘤的转移与复发，此种副作用的出 现可能与肿瘤组织中的TAMs的诱导有关[171。 因此本研究以TAMs为中心，寻找人肝癌组织中TAMs特异性标志物阐述其重要 复旦大学博士论文 中文摘要 性。观察临床有效的抗肝癌药物对TAMs的影响并分析其机制。 第一部分0D206鉴定肝癌组织中的肿瘤相关巨噬细胞的可行性研 究 织中的表达还未见相关报道。相对于体外细胞实验，原位观察人肝癌组织中TAMs的 分布及其鉴定具有重要意义。因此本部分利用人肝癌和癌周组织标本，分离原代细胞， 别肝癌组织中TAMs的可行性。 收集人肝癌和癌周组织标本，制作连续切片，免疫组织化学方法显示，CD206 在肝癌组织和癌周组织的表达完全不同。在肝癌组织中CD206表达在肿瘤间质的单 核巨噬细胞中并与CD68有共表达现象，而在癌周其呈管状表达，贴附于肝血窦内皮 内壁上与CD68的表达无共表达现象。为进一步证实免疫组化的发现，我们分离新鲜 sinusoidal 肝癌组织和癌周组织的CD206+细胞、巨噬细胞及肝血窦内皮细胞(1iver endothelial cells，LSECs)。流式细胞术(flow 巨噬细胞的真实身份，我们将分离的原代细胞体外培养。酶联免疫吸附实验 immunosorbent (enzyme—linked ELISA)检测上清液中的细胞因子水平发