肝硬化肝性脑病大鼠模型occludin蛋白的表达及脑水肿关系的研究.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………8 三、论文 前言………………………………………………………………99日U舌……………………………………………………………… 材料与方法………………………………………………………12 实验结果…………………………………………………………20 讨论………………………………………………………………28 结论………………………………………………………………3l 四、本研究创新性的自我评价………………………………………32 五、参考文献…………………………………………………………33 六、附录 综述………………………………………………………………36 在学期间科研成绩………………………………………………46 致谢………………………………………………………………47 个人简介…………………………………………………………48 ·中文论著摘要· 肝硬化肝性脑病大鼠模型occludin蛋白的表达与 脑水肿关系的研究 目 的 肝性脑病是肝硬化的严重并发症之一。其预后极差，发病率高，是肝硬化常 见的死亡原因。至今肝性脑病的确切发病机制尚不完全清楚，围绕其机制，学者 们提出了几种不同的假说，最主要的是氨中毒学说。肝性脑病时存在不同程度的 脑水肿，血氨升高可以促进肝性脑病的发生，并可以使脑水肿加重。目的对于脑 水肿的研究表明，血管源性脑水肿和细胞毒性脑水肿是主要的发病机制，这两种 发病机制同时参与肝硬化时脑水肿的形成过程。其中血管源性脑水肿发生以血脑 屏障(BBB)通透性的改变为主要原因。在BBB的结构中最重要的是紧密连接(tight 主要的功能调节蛋白，主要在脑血管内皮细胞中表达，是TJ完整性的最敏感和最 可靠的标志。近年来在慢性肝病中BBB中TJ相关蛋白的研究还很少。本研究应 用肝硬化动物模型，在氨负荷的作用下来研究脑组织occludin蛋白的表达与脑水 肿关系。 材料与方法 实验动物为健康雄性(SD)大鼠，将大鼠随机分为4组：正常组：无干预因 素；正常氨负荷组：实验末给予氨负荷；肝硬化组：制备肝硬化模型，不加外界 干预因素；肝硬化氨负荷组：制备肝硬化模型，实验末给予氨负荷。本实验通过 腹腔注射四氯化碳橄榄油溶液制备肝硬化动物模型。 l、血氨的检测：四组大鼠在给予氨负荷前及30分钟后分别经内眦静脉应用 AMON干片比色法测定血氨水平。 抗凝管采血lml，并在半小时内应用vitors 2、模型的制备和判断：给药后2小时观察大鼠状态，观察是否出现角膜反射 及翻转反射判断肝性脑病的发生。 3、血脑屏障通透性的检测：注射伊文思蓝溶液2小时后处死大鼠，取脑组织 溶于甲酰胺，离心后取上清液，于波长632nm进行比色，根据标准曲线计算出脑 组织EB含量，检测BBB通透性的变化。 4、脑水含量的检测：注射伊文思蓝溶液2小时后处死大鼠，完整取出脑组织， 干湿重法检测脑水含量。 5、苏木素．伊红(H．E)染色镜下观察肝脏及脑组织切片：取大脑及肝右叶组 织，应用40％多聚甲醛固定。常规H．E染色，显微镜观察肝脏、脑组织的改变。 6、应用免疫组化技术检测occludin蛋白在脑组织中的分布与表达：血 管内皮细胞胞浆内棕褐色染色或细胞浆内沿胞膜有棕褐色线形染色为阳性细胞。 7、应用Westernblot方法对occludin蛋白的表达作半定量分析。 认为差异有统计学意义。 结 果 1、模型制备情况：正常组、正常氨负荷组及肝硬化组角膜反射与翻转反射存 在，未出现肝性脑病；肝硬化氨负荷组中有5只大鼠角膜反射与翻转反射消失， 证明存在肝性脑病。肝硬化组有4只生成腹水，肝硬化氨负荷组有6只生成腹水。 显微镜下观察：肝硬化组及肝硬化氨负荷组肝小叶结构破坏，纤维组织增生，有 明显硬化结节形成，而正常组及正常氨负荷组未