肝癌患者CD4+CD25+CD127low-CD49d-调节性T细胞及肝癌复发转移关系的研究.pdf

中文摘要 转移关系的研究 中文摘要 肝细胞肝癌(hepatocellular 一，在恶性肿瘤相关死亡率中位居第三位。我国是肝癌高发地区，约占全球肝癌 病例一半以上。肝癌严重影响我国人民的健康事业，并带来了巨大的社会负担。 由于肝癌早期诊断较难，患者就诊时往往己属晚期。虽然近来手术切除、肝移植、 射频消融、肝动脉栓塞化疗和分子靶向治疗等手段对肝癌的治疗取得了很大的进 步，但总体上术后高复发率和高死亡率近来未有明显改善。免疫治疗作为肿瘤最 有希望的治疗手段越来越受到重视。同时肝脏作为免疫特惠器官又是免疫治疗理 想的靶器官。既往对肝癌的研究集中在肝癌细胞本身的生物学行为上，忽略了肝 癌演进过程中肝癌细胞与肿瘤微环境(tumor 胞之间的相互作用，而后者被认为在肿瘤的发展、侵袭中发挥重要的作用。具有 T 免疫抑制性作用的调节性T细胞(regulatorycell，Treg)在肿瘤细胞逃避局部微 环境的免疫监视从而发生免疫逃逸的过程中， 扮演着重要的角色。 本研究从肿瘤微环境中调节性T细胞的特异性表面标志入手，证实了在免疫 的免疫抑制表型，并与肝癌的临床病理特征相关。进而我们通过全基因芯片筛选 出较重要的调控肿瘤浸润调节性T细胞的免疫抑制功能相关的功能基因，分析肿 瘤浸润调节性T细胞与肿瘤细胞相互作用的免疫信号通路。基于凝集素芯片检测 HCC患者外周血调节性T细胞膜特征性的聚糖改变。最后通过对调节性T细胞 新的选择。 中文摘要 第一部分 1 本部分研究旨在探索CD4+CD25+CD 者体内不同部位(外周血、癌旁肝脏和癌灶)的分布和表达。 我们通过梯度离心结合酶消化法，建立了稳定的获取外周血、组织内浸润淋 巴细胞分离方法。借助于流式细胞仪，首次采用四色荧光分选淋巴细胞，配对比 CD49d。调节性T细胞的分布和免疫表型截然不同。首先，HCC患者肿瘤微环境 患者外周血调节性T细胞占整个CD4+T细胞比例显著高于健康对照者。HCC患 者肿瘤浸润调节性T细胞占整个CD4+T细胞比例显著高于配对的癌旁肝组织和 外周血。最后，HCC患者癌灶浸润调节性T细胞表达较高的免疫抑制表型，如 节性T细胞对活化分子CDl54的抑制率较对照明显增强，表明具有较强的免疫 抑制能力。结合体外扩增实验结果，这群淋巴细胞分泌高水平的免疫抑制因子 IL一10和TGF—pl，扩增后的细胞仍保持较高的抑制表型。我们分选出的肿瘤浸润 的这群具有抑制能力的淋巴细胞较癌旁肝组织和外周血来源的显示出更强的免 疫抑制能力。 表达调节性T细胞的特异性标志FoxP3，较其他相关研究文献可获得更高纯度的 调节性T细胞，并且这群高表达FoxP3的T淋巴细胞保持活性状态，可用于下 表现出更强的免疫抑制表型，体现了肿瘤免疫微环境中调节性T细胞的免疫抑制 功能，参与HCC的肿瘤生物学进程。 中文摘要 第二部分 基因表达谱分析 结合前部分研究结果和其他相关文献报道，我们可以认为癌灶浸润性调节性 T细胞之所以表达增强的抑制表型，必然是受到肿瘤微环境中肿瘤细胞和其他免 疫细胞的影响，导致其与免疫抑制功能相关的基因表达上调和信号通路激活。但 具体参与的调控基因和信号通路尚未有系统的报道。在本部分研究中，我们利用 Agilent全基因芯片对9例HCC患者配对的癌灶和癌旁肝组织中的调节性T细胞 进行全基因表达谱的对比分析，以期找出与免疫抑制功能相关的关键差异基因及 相应的信号通路。 我们利用酶消化法和梯度离心法分离出癌灶和癌旁肝组织浸润淋巴细胞，再 4000B芯片扫描仪扫描分析结果。结果 提后与Agilent全基因芯片杂交，GenePix 显示Hierarchical聚类分析样本划分不同组别明显。将标准设为