肝癌HepG2细胞IER5基因高表达细胞系的建立和其辐射效应研究.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………………………1 英文摘要………………………………………………………………5 研究论文肝癌HepG2细胞IER5基因高表达细胞系的建立 及其辐射效应研究 前言……………………………………………………………………．10 刖舌……………………………………………………………………．1U 材料与方法……………………………………………………………．12 结果……………………………………………………………………．29 附图……………………………………………………………………．33 附表…………………………………………………．…………………39 讨{仑……………………………………………………………………．．40 结论……………………………………………………………………．42 参考文献………………………………………………………………．43 综述 早期反应基因IER5的国内外研究进展……………………．45 致谢………………………………………………………………………．54 个人简历…………………………………………………………………．55 帐摘要 1㈣啾 肝癌HepG2细胞IER5基因高表达细胞系的建立 及其辐射效应研究 摘 要 原发性肝癌(简称肝癌)是我国常见恶性肿瘤，新发肝癌病例中55％ 在我国，诊治形式十分严峻，临床研究证实三维适形放疗是肝癌治疗的有 力武器。辐射敏感性是影响肿瘤放疗效果的重要因素，辐射敏感与辐射敏 感基因有关。如果某基因在辐射后出现表达变化，这种表达变化能够促进 肿瘤细胞凋亡或抑制肿瘤细胞生长，那么该基因就可能为肿瘤的辐射敏感 mRNA 基因。本课题组的前期研究显示：辐射可引起早期反应基因IER5 水平为未辐射细胞的11．54倍。国外文献揭示IER5基因与细胞分裂、细 胞凋亡有关。这就提示我们IER5基因可能与肝癌的辐射敏感性有关。 本研究旨在探索IER5基因在肝癌发生发展中的生物学功能及其辐射 敏感性。为了深入研究肝癌细胞IER5基因的辐射生物学功能，就有必要 探索IER5基因高表达及基因沉默对细胞辐射效应的影响。稳定高表达(定 义)是指将外源基因导入靶细胞的技术，常用的基因转染技术是将纯化的 含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。建立稳定的细胞 系，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，对靶细胞进 验以人肝癌HepG2细胞为研究对象，构建IER5基因高表达细胞系，研究 IER5基因在肝癌发生发展中的生物学功能及辐射效应。同期实验组其他 胞模型，研究基因表达抑制后对应参数的变化。两者对比结合，从基因水 平探索IER5基因与肝癌辐射有关的生物学功能，探求IER5基因是否为 肝癌的辐射敏感基因，能否成为肝癌放疗中一个潜在增敏靶点，为今后分 子靶向治疗药物的研发提供理论指导。 目的：本课题选择离体肝癌HepG2细胞作为研究对象，采用稳定转 染筛选单克隆技术，转染HepG2，建立IER5基因过表达细胞模型，探讨 中文摘要 影响，进一步探讨该基因的生物学功能，探求该基因是否为肝癌的辐射敏 感基因。 方法：1 立：设计特异性表达IER5基因的质粒，利用脂质体介导基因转染的技术， 克隆细胞的培养，形成了具有IER5基因高表达的单克隆HepG2细胞系， 即将与人类编码基因序列无同源性的片段与载体连接转染细胞。采用 Western IER5基因过表达的单克隆细胞系(据挑选单克隆细胞时的备份号将细胞 编号为HepG2—10、HepG2—11、HepG2—1 HepG2-21)。 影响：检测0Gy、2Gy、4Gy辐射情况下肿瘤细胞生长曲线，以及0Gy、 2Gy、4Gy辐射情况下细胞的周期及细胞凋亡(采用流式细胞术)。 结果：l 建立：经Western 细胞系，其细胞体积比HepG2．Control细胞体积小。 2