肝素在脂多糖诱导急性损伤大鼠血管内皮细胞损伤中的抗炎作用和其机制研究.pdfVIP

·中文论著摘要- 肝素在脂多糖诱导急性肺损伤大鼠血管内皮细胞损伤 中的抗炎作用及其机制研究 刖 吾 脓毒症是宿主的防御系统对入侵的病原微生物作出的过度炎症反应，发病率 30％-70％，是ICU患者最主要的死亡原因，发生脓毒症的患者接近30％会发生器 官功能障碍，其中肺脏是最早也是最容易受累的器官，ICU中脓毒症患者超过50％ 会发生急性肺损伤(acutelunginjury，AU)，发生ALI的脓毒症患者死亡率增高。 近年研究表明ALI与脓毒症具有相似的病理生理过程：宿主防御反应失控导致炎 症反应发生，内皮细胞损伤，凝血系统活化，纤溶受到抑制以及纤维化的发生。 2001年一项评价重症感染患者应用活化蛋白C(activatedC，APC)疗效 protein 的全球性研究结果表明治疗组死亡率下降6．1％，是迄今唯一证实重症感染患者应 用抗凝剂提高生存率的国际性研究，后期研究表明与APC复杂的抗凝、抗炎及抗 凋亡作用有关。近年越来越多的证据表明炎症与凝血之间存在广泛的交叉对话， 抗凝剂在治疗ALI中具有积极作用。 核因子．rB(nuclear 基因的转录，其中多种基因在脓毒症中发挥重要作用。细菌和细菌的成分如脂多 糖可以通过多种信号途径使NF．r,B活化，导致促炎因子的表达，如肿瘤坏死因子 (tumornecrosis lL—12及IL．18，并进一步活化NF—r,B和其上游的信号分子，形成恶性循环使炎症 反应扩大。因此，NF-r,B在炎症反应过程中处于核心位置。丝裂原活化蛋白激酶 kinase，MAPK)细胞内信号转导途径在调解下游蛋白质 (mitogcn-activatedprotein MAPK是MAPK家族成员之一， 表达及炎症介质生成中起到重要作用，其中p38 在炎症反应、调节细胞周期、细胞死亡、发育、分化及肿瘤的发生等过程中起到 关键作用。 肝素是一种天然形成的氨基葡聚糖，作为一种有效的抗凝剂在临床应用已超 过半个世纪的时间。在拯救脓毒症运动指南中推荐应用300．500U／h的普通肝素或 低分子量肝素预防深静脉血栓形成。肝素的抗凝作用机制是提高了抗凝血酶的活 性，从而强烈抑制凝血酶、活化的因子X的活性。近年来，一系列临床和基础研 究表明肝素除了其抗凝特性外，还可以通过多种途径调节炎症反应。肝素抑制促 导的炎症反应，并通过增加一氧化氮和前列环素的生成减少了内皮细胞功能障碍。 在高动力性脓毒症中，肝素改善内皮细胞功能和血管反应性。然而，其抗炎作用 和器官保护机制迄今仍不清楚。因此，本研究中我们试图探讨肝素在急性肺损伤 动物模型中的抗炎作用，并对体外脂多糖刺激人肺微血管内皮细胞的抗炎作用及 作用机制进行研究，探讨了不同浓度肝素的作用，从而在细胞水平探讨肝素在脓毒 症中的作用机制。 材料与方法 一、动物模型 急性肺损伤应用高剂量普通肝素组(n-12)。急性肺损伤组鼠尾静脉注射脂多糖 6mg／kg，两个肝素组在注射脂多糖前15分钟分别经鼠尾静脉注射普通肝素 100U／kg和300U／kg，正常对照组经鼠尾静脉注射等量生理盐水。 二、标本的采集与处理 各组于造模后6小时腹主动脉剖开处死动物，其中6只取左肺置于4％多聚甲 醛中过夜，石蜡包埋，制作59m组织切片，用于形态学观察、免疫组织化学检查； 另外6只取左肺测定肺干湿重比，右肺下叶测定伊文思兰通透性。 三、细胞培养 人肺微血管内皮细胞购于上海拜力生物技术公司。生长于含10％胎牛血清的 次，取指数生长期细胞用于检测。 四、实验方法 2 (一)组织水平 1．肺脏组织形态学观察：H-E染色 blue 2．肺脏血管通透性测定：伊文思兰(evans dyes。EBD) 3．肺脏干湿重比测定 4．免疫组织化学技术：细胞因子、粘附分子及NF．rB在肺脏组织的表达 (二)细胞水平