肝脏部分切除对肝脏干细胞增殖的作用.pdfVIP

肝脏部分切除对肝脏干细胞增殖的影响 硕士研究生：施鹏旭 指导教师：巩鹏 专业名称：外科学 摘要 目前，肝移植虽已成为治疗终末期肝病的重要手段，但供体短缺、手术损伤、 免疫排斥以及费用高昂等问题构成了肝移植技术发展的主要障碍。因此，开展具 有侵入性小，并发症少等特点的肝脏细胞移植(Hepatocyte 具有重要临床意义。肝脏细胞移植分为肝细胞移植与肝脏干细胞移植。成熟肝细 胞虽然具有一定再生能力，可在一定程度上重构肝脏，但临床实验中，肝细胞移 植往往因为细胞数量不足或再生能力有限，而不能产生充分、长期的生物学作用。 肝脏干细胞具有长时间持续扩增的能力，能在体外扩增达到临床所需的细胞数量， 且移植后在体内也可增生。所以，肝脏干细胞移植可能在肝脏再生治疗(Therapeutic liver repopulation)中发挥更重要的作用。 目的：通过肝脏部分切除的方法构建SD大鼠肝干细胞增殖模型，并检测部分切 除后存留肝脏中干细胞的增殖。 方法：采用部分肝切除法建立大鼠肝叶切除模型并按切除比例分组；使用IV 型胶原酶法提取，分离切除部分肝脏后存留的肝脏中的细胞，贴壁后进行体外接 factor， 种培养；培养过程中向RPMI1640中加入肝细胞生长因子(hepatocytegrowth HGF)、纤维母细胞生长因子一4(fibroblast growth 诱导；应用流式细胞仪检测不同组别肝脏干细胞CD34、Thy的表达；光镜下对比 观察各组肝脏干细胞的含量和生长情况；免疫荧光法鉴定各组肝脏干细胞AFP、 CKl8的表达；WesternBlot检测细胞中AFP的表达并进行统计学分析。 结果： 1．通过切除SD大鼠不同比例的肝叶组织构建大鼠肝叶切除的模型。 2．胶原酶法提取、分离出圆形及类圆形贴壁细胞，经体外培养可见细胞呈集 团、集落样生长，说明有肝脏干细胞的增殖。 3．流式细胞仪检测到肝脏部分切除后第7天存留肝脏的细胞中CD34、Thy呈 阳性表达，其中CD34含量为2．6％，Thy含量为1．3％；未做肝脏切除的对照组肝 脏细胞中CD34、Thy呈阴性表达。 强阳性表达；肝脏切除73．1％后的存留肝脏细胞中AFP、CKl8呈阳性表达；在未 切除的对照组中呈阴性表达。术后第7天存留肝脏细胞中AFP、CKl8星强阳性表 达；术后当天存留肝脏细胞中AFP、CKl8呈阳性表达；术后第14天存留肝脏细 胞中AFP、CKl8呈阴性表达。肝脏部分切除后存留鼠肝灌洗15分钟后细胞中AFP、 CKl8呈强阳性表达；肝脏部分切除后存留鼠肝灌洗10分钟后的细胞中AFP、CKlg 呈阳性表达；肝脏部分切除后存留鼠肝灌洗20分钟后的细胞中AFP、CKl8呈阴 性表达。 5．Western Blot检测到肝部分切除后存留肝脏细胞中AFP呈阳性表达。切除肝 脏83．4％后存留肝脏细胞中AFP的表达与切除73．1％后存留肝脏细胞中AFP的表达 相比较，未见显著差异，P≥O．05。存留鼠肝灌洗15分钟后的肝脏细胞与存留鼠 肝灌洗10分钟后的肝脏细胞的AFP表达相比较，明显升高，P0．05。术后第7 天与术后当天的存留肝脏细胞中AFP表达相比较，明显升高，P0．05。 结论： 1．SD大鼠切除肝脏83．4％的存留肝脏含有肝脏干细胞的数量最多，切除肝脏 73．1％的存留鼠肝中含有的肝脏干细胞的数量次之，未切除肝脏的鼠肝含有干细胞 的数量最少。 2．术后第7天存留鼠肝中肝脏干细胞的数量最多，术后当天存留鼠肝中肝脏 干细胞的数量次之，术后第14天存留鼠肝中肝脏干细胞的数量最少。 3．胶原酶灌洗存留鼠肝15分钟后的肝脏中含有干细胞的数量最多，灌洗存留 鼠肝10分钟后的肝脏中含有干细胞的数量次之，灌洗存留鼠肝20分钟后的肝脏 中含有干细胞的数量最少。 关键词：肝切除肝脏干细胞增殖 2 Researchofliverst