几种食品添加剂及蛋白质、DNA相互作用的的分析研究.pdfVIP

IIMIHIIIIIIIIIIiUllUlIIUl Y2403170 摘要 摘要 本论文通过模拟人体生理酸度环境(pH7．4)，采用荧光光谱、紫外一可见吸 收光谱、圆二色谱和红外光谱技术，研究了几种合成食品添加剂与血清白蛋白、 小牛胸腺DNA相互作用的机制，对于深入认识人工合成食品添加剂的毒性机理 具有重要的理论意义。 本文的主要研究内容和结果概述如下： 1．简要介绍了血清白蛋白和DNA的结构、功能和生理特性，并论述了它们 与小分子相互作用的研究情况和方法。 2．在模拟人体生理酸度条件下，采用荧光猝灭法、紫外一可见吸收光谱法、 圆二色谱和红外光谱技术研究了麦芽酚与牛血清白蛋白(BSA)的结合特性。实验 结果表明，麦芽酚通过与BSA形成新的复合物使BSA的荧光强度降低；依据 van’t kJ·mol-1、757．0土 Hoff方程计算得到的焓变(创两和熵变(△研分别为119。2-+-0．1 0．4J．m01-1．K-1，表明疏水作用力是麦芽酚与BSA结合的主要驱动力。利用非辐 射能量转移理论计算出麦芽酚与BSA的结合距离为3．01nnl。位点竞争实验表明 I)。通过对同步荧光 麦芽酚在BSA上的结合位点在亚域IIA的疏水空腔qb(Site 光谱、圆二色谱和红外光谱的分析表明麦芽酚能够改变BSA微环境的极性，使 BSA的构象发生变化。 7．4的riffs．HCl缓冲溶液中， 3．以人血清白蛋白(HSA)为蛋白模型，在pH 运用多种光谱技术研究了苋菜红与HSA的作用机制及苋菜红诱导HSA构象的 变化。结果显示，苋菜红通过静态猝灭方式影响了HSA的荧光特性，两者间的 主要作用力是氢键和疏水作用力。蛋白变性实验和竞争实验的结果显示HSA的 Site I位是苋菜红在蛋白上的结合位点。疏水性探针(8．苯氨基．1．萘磺酸，ANS) 结合荧光滴定实验发现，苋菜红与HSA的结合增加了HSA的疏水性。圆二色 谱和红外光谱研究表明，苋菜红的存在诱导了HSA的构象发生变化，导致旷 螺旋含量减少，降低了HSA的稳定性。 4．在生理酸度下，以溴化乙锭(EB)为探针，运用荧光、紫外～可见吸收光谱、 圆二色谱和红外光谱法并联合熔点实验及粘度测定，研究了小牛胸腺 摘要 谱发生减色和红移现象，显著地增加ctDNA的熔点和粘度。这些结果表明两者 发生了嵌插结合。圆二色谱和红外光谱的分析表明BHT并没有使ctDNA的B 型构象发生改变， BHT主要与ctDNA的A—T碱基对发生结合。 7．4的Tris．HCl缓冲溶液中，以吖啶橙(A0)为探针，采用荧光、紫 5．在pH 外一可见吸收和圆二色谱法结合熔点及粘度测定，研究了食品防腐剂苯甲酸钠 (SB)与ctDNA的作用机理。同时，引入化学计量学多元曲线分辨一交替最小二乘 法(MCR-ALS)解析了扩展的紫外吸收光谱的数据矩阵，获得反应体系中的目标 显示SB与ctDNA发生了结合并形成新的复合物。此外，SB能够通过静态猝灭 机理猝灭ctDNA—AO的荧光，ctDNA的熔点和粘度增加以及圆二色谱信号的变 化证实了SB与ctDNA发生嵌插结合。 6．在pH7．4缓冲溶液中，采用化学计量学平行因子分析法(PARAFAC)结合 三维同步荧光光谱法对食用色素靛蓝(IC)与ctDNA的相互作用模式进行了评估。 单双链实验、熔点和粘度测量结果的佐证。 关键词：麦芽酚；苋菜红；丁基羟基甲苯；苯甲酸钠；靛蓝；牛血清白蛋白； 人血清白蛋白：小牛胸腺DNA荧光光谱法；紫外一可见吸收光谱法；圆二色谱 法；傅立叶变换红外光谱；熔点实验；粘度测定；多元曲线分辨一交替最小二乘 法；平行因子分析 Abstract