过表达Smac对人胰腺癌MiaPaCa-Ⅱ细胞的化疗增敏影响.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………l OOOOOOODGO 英文摘要………………………………………O O…………………5 前言……………···…······…···……···……······……““““”””…·10一 日IJ舌“……………”””“一“””““““”…一“””””一““““”””…。上 00 OOGOOOO 材料与方法……………………………………………O OOOO 0…12 OO OOOOIOOO00 OOOOO···……··……·······…·…·······………………·2l 结果…O 0OOOO………………………………………25 附图、附表………………0 OO OO O……···…···············39 讨{仑···········………············…·······…O 参考文献………………………………………………………………4l OOOOOOOO……．．·44 综述Smac在肿瘤进展中的研究现状…………………O 致调}………………”一一”一…一．．．．“一““……““”…一”一“““…………58 个人简历……………………………………………………………………59 中文摘要 i 过表达Smac对人胰腺癌MaPaCa-2细胞的化疗增敏作用 摘 要 目的：胰腺癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一，恶性程度极高，预后 很差。由于早期诊断困难，胰腺癌手术切除率低，化疗、放疗亦无突破性 进展。分子靶向治疗是近年研究的亮点，但在胰腺癌治疗中无令人满意的 成果。Smac是一种存在于线粒体并调节细胞凋亡的蛋白，主要通过拮抗 促进细胞凋亡。以往研究发现在胃癌、膀胱癌、肺癌等多系统肿瘤中，Smac 高表达与肿瘤的发生、发展，肿瘤的分期、转移等密切相关，但关于Smac 在胰腺癌中的作用的研究很少。本研究通过构建Smac真核表达载体，观 制，以期为胰腺癌的分子靶向治疗提供新依据。 方法： 2用逆转录．聚合酶链式反应(revers transcription 法从白血病K562细胞中获取细胞的cDNA。 PCR产物用HindlII及BamHI进行酶切，然后纯化。将纯化产物在16℃ Q，加入2×YT 进行连接，连接3小时后将连接产物转化大肠杆菌DH5 培养基800I_tl，孵育60分钟，卡那平皿铺板，次日挑克隆。挑选阳性克隆 进行PCR鉴定，同时将扩增后产物纯化，送检测序。 Q中提取 4质粒的提取：用质粒小抽试剂盒从过夜培养的转化DH5 重组质粒DNA。 5pEGFP．C 胞分为3组，命名为未转染组、转空载体组和转Smac组，取对数生长期 中文摘要 系统作用下转染入转空载体组MiaPaCa-2细胞，未转染组细胞未予处理， 于转染24小时时于荧光显微镜下观察荧光蛋白表达强度。