醋柳黄酮和其单体抑制心肌肥厚的机理研究.pdfVIP

目 录 醋柳黄酮及其单体抑制心肌肥厚的机理研究„„„„„„1 1 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„9 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„11 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„23 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„41 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„4 1 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„46 2 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„47 醋柳黄酮及其单体对心肌肥厚抑制作用的研究进展 （综述） 3 „„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„47 2 醋柳黄酮及其单体抑制心肌肥厚的机理研究 摘 要 目的： 在培养原代大鼠心肌细胞的基础上，用血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心 肌细胞肥大为模型，探讨醋柳黄酮及其单体 （槲皮素与异鼠李素）抑制心 肌肥厚的作用机理是否与钙调神经磷酸酶信号通路有关。 方法： 取新生SD 大鼠心肌细胞(1-3d)，运用差速贴壁分离法提纯后进行培养。 心肌细胞常规培养 72 小时，换无血清培养基同步化 24 小时后，分别加入 不同药物进行孵育。实验分组：①对照组 （Control ）：不加任何处理因素， 与加入处理因素的组别共同进行换液处理；②模型组（Ang Ⅱ）：加入 Ang -6 Ⅱ10 mol/L，建立心肌肥厚模型；③醋柳黄酮组 （TFH group ）：预先加入 -6 醋柳黄酮 100mg/L ，再加入Ang Ⅱ10 mol/L ;④槲皮素组 (Quer group)：预 -6 先加入槲皮素 100umol/L ，再加入 Ang Ⅱ10 mol/L ;⑤异鼠李素组 (Isor -6 group)：预先加入异鼠李素 100umol/L ，再加入Ang Ⅱ10 mol/L；⑥缬沙 -6 坦组 (Valsartan group) ：预先加入缬沙坦 10 mol/L ，再加入 Ang Ⅱ -6 10 mol/L。采用抗 α-actin 免疫组化鉴定心肌细胞；Image-Pro Plus 专业图 像处理软件测定细胞表面积；考马斯亮蓝法测定细胞总蛋白含量；采用 p-NPP 酶 法 测 定 心 肌 细 胞 肌 浆 网 钙 泵 （ Sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPases,SERCA ）活力；定磷法测定钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN ） 活性及 RT-PCR 法半定量测定 CaN mRNA 表达。 结果： ⑴心肌细胞鉴定：心肌细胞经抗 α-actin 免疫细胞化学染色后，细胞质 内可见棕黄色丝状物，证实为心肌细胞。 ⑵心肌细胞表面积：与 control 组比较，AngII 组的细胞表面积显著增 3 2 加（761.75±95.09 vs 498.27±67.31um , P0.01 ），其余各组细胞表面积的增 加无统计学差异（P0.05 ）。与AngII 组相比，Valsartan 组、Quer 组、Isor 2 组及 T