铂类药物耐药卵巢癌细胞系中Annexin A3及TAp73蛋白相互作用的研究.pdfVIP

摘要 铂类药物耐药卵巢癌细胞系Annexin A3-e：jTAp73 蛋白相互作用的研究 硕士研究生孙欣欣 导 师黄冬梅 郑州大学第二附属医院妇产科 河南郑州450014 摘要 背景和目的 卵巢癌发病率在女性生殖系统恶性肿瘤中占第3位。却是女性生殖器官恶性 肿瘤中首位的致死性疾病，临床医师已经把卵巢癌归类到“沉默杀手”之列。68％ 的病例被诊断时已经是晚期，五年生存率低于45％。诊断后对原发瘤的第一次 手术治疗辅以铂类联合紫杉醇的化疗是卵巢癌治疗中最重要的步骤，但耐药的 发生使超过80％的病人经历早期复发，铂类药物的耐药是卵巢癌治疗中的一个 最主要的障碍。因耐药机制有多因素、多途径、多层次的特点，目前尚未达成 共识。基因组学的研究开辟了蛋白质组学的新篇章，蛋白质问有序的相互作用 参与调控细胞间和细胞内的信号转导。酵母双杂交技术是功能蛋白质组学技术 之一，是在真核模式生物酵母中进行的研究活细胞内蛋白质相互作用的技术。 Annexin A3是Annexin家族中唯一具有酶活性的成员，具有抑制磷脂酶A2 和抗凝的功能，并在控制细胞增殖方面发挥作用。新的研究发现AnnexinA3蛋 白在卵巢癌铂类耐药细胞株中的表达明显升高，同时在mRNA和蛋白质的表达 Annexin 水平得到验证。在进一步的临床标本验证中检测发现， A3在临床卵巢 癌铂类耐药患者的组织中表达明显升高，且AnnexinA3高表达组的无瘤生存期 显著缩短。此外，Annexin A3高表达的细胞对铂类药物的耐药性明显增强，但 与紫杉醇、表阿霉素等药物无交叉耐药性，提示AnnexinA3蛋白可能成为卵巢 癌特异性的铂类耐药相关蛋白。 I 摘要 偶然发现的一个假阳性的cDNA克隆，表达两类功能对立但是互相制约的多种 异构体：一类是羧基木端异构体(TAp73)；另一类是氨基末端异构体(ANp73)。 TAp73是有转录激活能力的p73蛋白，能上调p53的靶基因，导致细胞生长抑 制，抑制细胞增殖周期，诱导凋亡，使肿瘤细胞对化疗和放疗的敏感性增加。 氨基术端异构体(ANp73)的表达会导致肿瘤细胞对化疗耐药。 本研究应用酵母双杂交系统检测在铂类耐药卵巢癌细胞系COCl／DDP中 AnnexinA3蛋白与TAp73蛋白的相互作用。 方法 A3 质粒载体相连，构建pGBKT7．Annexin 转化Y2HGold和Y187酵母菌株，检测融合蛋白对菌株无毒性和自激活后，将 pGBKT7．Annexin A3 和pGADT7．TAp73两重组质粒是否具有相互作用。 让甲 ：日术 成功扩增了铂类耐药卵巢癌细胞系COCl／DDP中Annexin A3与TAp73基因 和pGADT7一TAp73重组载体，检测融合蛋白对菌株无毒性和自激活作用，通过 A3和 pGADT7．TAp73的阳性克隆，鉴定了pGBKT7．Annexin 两重组质粒具有相互作用。 结论 本实验成功构建了pGBKT7一Annexin 达pGBKT7一Annexin TAp73蛋白之间确有相互作用。 交技术