部分性癫痫伴热性惊厥附加症患者SCN1A基因突变筛查和内含子突变对剪切影响的体外分析.pdfVIP

部分性癫痫伴热性惊厥附加症患者 SCN1A 基因突变筛查及内含子突变对剪切影响的体外分析 部分性癫痫伴热性惊厥附加症患者SCN1A 基因突变 筛查及内含子突变对剪切影响的体外分析 研究生：邹 欣 导 师：刘晓蓉 教授 广州医学院神经科学研究所 广州医学院第二附属医院 广州市昌岗东路 250 号（510260 ） 中文摘要 目 的 在部分性癫痫伴热性惊厥附加症（PEFS+ ）患者中筛查 SCN1A 基因突变， 研究 SCN1A 突变与 PEFS+ 的关系；研究不同内含子突变对 SCN1A 基因剪切的影 响；总结PEFS+ 的SCN1A 突变特点，从突变的角度探讨 PEFS+作为 Dravet 综合 征（DS ）和全面性癫痫伴热性惊厥附加症（GEFS+ ）过渡表型的可能。 研究对象和方法 收集符合以下标准的病例的临床资料及基因组 DNA ：(1)起病前精神运动发 育正常，起病后无明显精神发育迟滞或仅有轻度异常；(2)于 3 个月至 6 岁间开 始出现热性惊厥，随后可出现非热性癫痫发作或 6 岁以后仍有热性痫性发作；(3) 除 GTCS 外，非热性发作仅表现为部分性发作或部分继发全面性发作，无其它痫 性发作形式；(4)排除肿瘤、外伤、感染、局灶性皮质发育异常等症状性癫痫；(5) 排除 Dravet 综合征等特发性癫痫。采用高效液相色谱仪(DHPLC)与直接测序结 合的方法，对患者 SCN1A 基因外显子和剪切相关内含子区进行突变筛查。对新 发现的突变，通过检索多态性位点数据库及设置正常对照组（100 例）进行验证； 通过构建迷你基因模型转染真核细胞的方法研究内含子突变 c.473+5 GA 、 3 部分性癫痫伴热性惊厥附加症患者 SCN1A 基因突变筛查及内含子突变对剪切影响的体外分析 c.473+110 AG 对剪切的影响；通过检索 SCN1A 突变数据库及复习文献，结合 本研究结果总结 PEFS+ 的SCN1A 突变特点，对比 GEFS+和 DS ，分析PEFS+作 为 GEFS+和 DS 过渡表型的可能性。 结 果 共收集PEFS+病例37 例，发现4 个SCN1A 基因突变：c.473+5 GA、c.473+110 AG 、c.1028+35 TC、c.2378 CT，其中 c.473+5 GA 可引起前体 mRNA 异常 剪切导致蛋白质截短；c.473+110 AG 对剪切无影响，可能为非致病性突变。截 止目前，共报道 PEFS+表型 SCN1A 突变 20 个，包括：错义突变 17 个、剪切位 点突变 2 个、移码突变 1 个。PEFS+主要由错义突变引起，52%错义突变位于电 压感受区和中央孔区（S4～S6 ），比例明显高于 GEFS+ （27.3% ）接近于 DS （60.2%) ）。剪切位点突变和移码突变虽然可以导致PEFS+ ，但不是其主要突变 形式。 结 论 （1）SCN1A很可能是PEFS+致病基因。（2 ）PEFS+主要由SCN1A错义突变 引起，突变位点主要位于重要功能区域（S4-S6 ）；剪切位点突变和移码突变亦 可导致PEFS+ ，但不是其主要突变形式。（3 ）PEFS+在SCN1A突变形式和突变 位点方面的特点提示它可能是DS和GEFS+间的一种过渡表型。（4 ）SCN1A剪切 位点突变可能通过引起蛋白质截短使钠通道功能丧失，最终导致PEFS+ 患者发 病。 关键词 热性惊厥；部分性发作；癫痫；SCN1A ；突变 4 部分性癫痫伴热性惊厥附加症患者 SCN1A 基因突变筛查及内含子突变对剪切影响的体外分析 Screen for SCN1A mutations in patients with partial epilepsy with FS plus and splicing assay of the intronic mutations in vitro