DNA改组(DNA shuffling)和其研究进展.pdf

维普资讯 第25卷第 1期 生 物 学 杂 志 Vo1．25 No．1 2008年2月 JOURNALOFBIOL0GY Feb，2008 DNA改组 (DNAshuffling)及其研究进展 俞 路，王雅倩，章世元 (扬州大学动物科学与技术学院，江苏 扬州 225009) 摘 要：自1994年首次提 出至今，DNA改组已经成为定向进化最为有效的方法之一。无论DNA、蛋 白质还是生物 体的进化，DNA改组都有十分突出的表现。通过对十余年来DNA改组的发展作以简要综述，为 日后相关研究的开 展提供理论基础 。 关键词：定向进化；DNA改组；有性PCR；分子育种 中图分类号：Q784 文献标识码：A 文章编号：1008—9632(2008)01—0012—05 变异使得物种的进化成为可能，其实质是生物机 PCR)或分子育种 (molecularbreeding)，相 比之下采用 体在形态 、生理等方面获得某些不是来 自亲代的特征。 了大片段交换，适用的靶序列长度宽 ，而且具有可反复 如果没有变异的存在，地球上的生命 只能停滞在原始 筛选和无义突变少等优点。同时，DNA改组并不是针 的类型，不可能构成形形色色的生物界 ，更不可能有人 对蛋白质的某一种特异性进化，而是可以实现 目的蛋 类纷繁的进化。 白的多种特异性共同进化。 1 最初的DNA改组 最初的DNA改组是在随机诱变的基础上发展来 的，经多次改组、筛选后得到理想 的突变体 ，主要有以 下几个步骤 ： (1)制备多种 同源核苷酸序列作为模板 ，建立初 级文库 。 (2)用 DNase或超 声波等方法处理 ，产生 随机 片段 。 (3)不加引物，利用PCR技术进行重组。 (4)产物序列接近 目的基 因长度 时加入两侧引 物，经少数循环扩增得到全长 目的基因。 (5)产物通过载体转入宿主细胞后在特定选择压 图表 1 DNA改组过程简 图 力下筛选，得到的突变体作为下一次 DNA改组的模 Fig1DNA shufflingMethodology 、 板 ，建立次级文库。 1994年，Stemmer 在 Nature发表了一篇题为Rapid 2 DNA改组的发展 evolutionofaproteininvitrobyDNAshuffling的文章， 2．1 交错延伸过程 (staggeredextensionprocess，StEP) 首次提出了DNA改组技术。Stemmer以B一内酰胺酶 Zhaol3等人于 1997年设计了巧妙的PCR程序 ，对 系统为试验对象，用 DNA改组 ，经过三轮筛选和两次 D