阿托伐他汀联雷帕霉素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE).pdfVIP

中文摘要 阿托伐他汀联合雷帕霉素治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 摘 要 目的：多发性硬化是一种常见的中枢神经系统自身免疫性疾病， 全球有超过250万患者受累。多发性硬化作为一种慢性疾病，在缓解 期需要长期应用药物控制病情。目前用于多发性硬化缓解期的药物有 干扰素．B，醋酸格拉默(GA)，米托葸醌等，但是这些药物不能完全 控制多发性硬化的病情，并且由于这些药物需要皮下或静脉注射，长 期应用有诸多不便。所以方便，副作用少的口服治疗逐渐受到欢迎。 包括芬戈莫多，特立氟胺在内的一些口服药物在治疗多发性硬化的临 床研究方面取得了肯定的结果，但在用药安全性方面尚需进一步评 估。阿托伐他汀作为临床常用的降血脂药物，其安全性已经得到肯定。 而且他汀的非调脂作用越来越多的引起人们的关注，尤其是他汀在自 身免疫病的治疗方面取得令人意想不到惊喜。雷帕霉素是一种口服免 疫抑制剂，主要用于抑制器官移植后的免疫排斥反应。雷帕霉素的有 效性及安全性己经被一个开放的临床实验所证实。在这个临床实验 中，临床确诊的RRMS或继发进展性MS接受雷帕霉素治疗后均明 显受益，主要表现为新发的核磁增强病灶和发作次数减少，并且其毒 副作用在可接受范围内。雷帕霉素在大鼠或小鼠的EAE动物模型中 同样发挥作用，可以有效的抑制EAE发病初期和高峰期的病情。 新的CD4+T细胞亚型，主要分泌IL．17、TNF．a等炎性细胞因子。 有人发现在多发性硬化患者的脑组织和外周血中IL．17均异常高表 在控制自身免疫病的发生 达。Treg是另一大类CD4+T细胞亚型， 发展中起着主要作用。近年来，随着Treg细胞表面标志物FOXP3+ 的确定更是大大促进了对Treg细胞的研究。越来越多的证据倾向于 Treg功能失活是多发性硬化发病的主要原因。阿托伐他汀可能通过调 节THl7和Treg的平衡来控制自身免疫性疾病。有研究发现雷帕霉 素并非抑制全部的T细胞亚型增殖，在体外可以选择性扩展nTreg细 中文摘要 胞亚群，并且可以在诱发1型糖尿病的NOD小鼠身上建立长期的免 疫耐受。 在哺乳动物的细胞中，雷帕霉素可以细胞内的免疫球蛋白FK506 免疫蛋白，12(FKBP．12)结合形成复合物。这种复合物可以阻断一 类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶的激活，这一类激酶被称为哺乳动物的雷 帕霉素作用靶(roTOR)，其与细胞周期进程，蛋白合成以及抑制抗 原诱导的T或B细胞增殖密切相关。雷帕霉素可以与细胞内的免疫 密切相关，阻断mTOR信号通路，势必会影响MAPK信号通路，进 而减弱雷帕霉素的免疫抑制效应。阿托伐他汀同样可以扩增Treg细 胞亚群。阿托伐他汀的免疫抑制作用与MAPK信号通路密切相关。 阿托伐他汀的中间产物通过翻译后蛋白质修饰可以调节MAPK信号 胞亚群。由此我们推论阿托伐他汀可以抑制雷帕霉素反馈性上调erk 表达，增强雷帕霉素的免疫抑制效应。为阿托伐他汀联合雷帕霉素进 一步临床应用治疗多发性硬化提供相关实验支持。 方法： 1．EAE模型建立 将抗原MOG 35．55用生理盐水稀释成5mg／ml，并按1：1等体 乳化。乳化后按每只O．1ml于C57BL／6小鼠脊柱两侧分四点皮下注射， 第Oh及第48h腹腔注射O．5ml PTX(500ng／只)。 2膏申经功能评分 建立EAE模型后，分别用阿托伐他汀和雷帕霉素干预EAE小鼠。 采用Knoz评分法每天给小鼠评分，连续观察30天，具体评分标准 如下：O分无症状；1分尾部失去张力；2分后肢力弱；3分后 肢瘫痪；4分后肢及前肢瘫痪：5分濒临死亡或死亡。筛选出阿 托伐他汀和雷帕霉素的最佳临床剂量及亚临床剂量。之后将亚临床剂 量的阿托伐他汀和雷帕霉素联合应用干预EAE小鼠并观察神经功能 2 中文摘要 评分。 3．免疫组化法检测IL．17的表达 免疫后第17．21天，每组各取5只小鼠，经水合氯