高分辨率溶解曲线(HRM)技术在高血压患者MTHFR基因多态性筛查中的运用.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………1 英文摘要…………………………………………………………………4 英文缩写…………………………………………………………………7 态性筛查中的应用 亩行言………………………………………………………………………………………·8 日U舌………………………………………………。：……………………………………一 材料与方法…………………………………………………………‘11 结果…………………………………………………………………17 附图…………………………………………………………………18 附表…………………………………………………………………20 讨论…………………………………………………………………22 结论………………………………………………………………………………………·26 参考文献……………………………………………………………·26 综述高分辨率熔解曲线分析技术及其应用进展………………………30 致谢………………………………………………………………………39 个人简历…………………………………………………………………·40 中文摘要 高分辨率溶解曲线(HRM)技术在高血压患者 MTHFR基因多态性筛查中的应用 摘 要 的原发性高血压，近年来越来越受到人们的重视，它以血Hcy水平增高 为特点(Hcy_10vmol／L)，是动脉粥样硬化的独立危险因素，与外周血管 病变、脑血管病变、高m压、高血压性心脏病、冠状动脉阻塞及血栓形成 的发生密切相关。 reductase， 关的5，10．亚甲基四氢叶酸还原为5一甲基四氢叶酸，这一代谢途径的正常 运转在维持血浆中同型半胱氨酸正常水平中至关重要。MTHFR常见的突 222 变为677位碱基C被T置换，产生AlaVal错义突变，这一突变位于 叶酸水平和升高Hcy水平，从而干扰DNA合成和损伤修复，引发包括H 型高血压在内的多种疾病。因此，本课题组开展的在高血压患者中筛查 MTHFR基因多态性十分必要，但是现有临床使用的SNP位点检测，常为 一代测序，耗时长，成本高，已经满足不了临床检测的需要，也不适合大 规模用于MTHFRC667T的流行病学调查研究。 Resolution 高分辨率溶解曲线分析技术(High Melting，删)是结合饱 和荧光染料、未标记探针和实时荧光定量PCR的～种新的检测基因突变 与基因分型的分子诊断技术，具有高通量、低成本、简单快捷、准确、灵 敏度和特异性高和真正闭管操作等优点。其次，传统DNA样本往往从血 液中抽提DNA，即收集病人的血样标本，这种方法有几个明显的缺点： 需要具备医务人员及一定的采血设备；抽血的疼痛造成排斥拒绝采样；侵 入性采集增加了感染的可能性；采集后血样必须低温运输保存。而从唾液 中抽提DNA可以避免以上缺点，可提供无疼痛、非侵入性的方法，无需 忍受抽血的疼痛和感染的风险，即可获得高质量、高数量的样品，受测者 排斥性低，婴儿和老人都能方便地获得DNA样本。 中文摘要 因此，本课题旨在将唾液抽提DNA和HRM技术结合起来，建立一 种快速检测MTHFR基因C677T多态性的方法。 研究方法： 高血压患者，再从我院体检中心选取500例健康人员为健康对照组，每人 纯试剂盒提取唾液DNA，使用上海凡济生物科技有限公司的全血DNA 较，评估从唾液抽提DNA用于后续HRM法的可行性。 计MTHFR CFX 件，直接应用Bio—Rad 扩增产物进行测序，比较两种方法的灵敏度和特异性。 采用EDTA抗凝管收集患者空腹静脉血4ml，测定血Hcy和叶酸水平， 高血压患者根