骨髓间充质干胞移植在输尿管不全梗阻大鼠肾脏中的分化.pdfVIP

目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………7 三、论文 前言………………………………………………………………………………8 刖吾………………………………………………………………………………芍 材料与方法………………………………………………………………………9 结果……………………………………………………………………………16 讨论……………………………………………………………………………22 结论……………………………………………………………………………25 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………26 五、参考文献………………………………………………………………………27 六、附录 综述…………………………………………………………………·………”29 致谢……………………………………………………………………………36 个人简介………………………………………………………………………37 ·中文论著摘要· 骨髓间充质干细胞移植在输尿管不全梗阻大鼠肾脏中 的分化 目 的 梗阻性肾病(obstructive nephropathy，ON)是泌尿外科常见疾病，以肾小管 间质纤维化为主要病理特点。儿童梗阻性肾病最终可导致终末期肾脏疾病 renaldiseaseESRD)，梗阻性肾病占所有ESRD的O．3％，占所有儿童 (end．stage 肾移植的16．1％。在人类梗阻性肾病中，多数为不全性梗阻。 骨髓间充质干细胞(MSCs)具有自我增殖和多向分化潜能的特点，可向中胚 层、内胚层和神经外胚层来源的组织细胞分化，包括成骨细胞、心肌细胞、神经 细胞和肾脏细胞等，有研究表明骨髓MSCs在急性肾脏损伤小鼠模型中可以促进 肾脏结构修复、改善肾功能。肝细胞生长因子(HGF)是促进成体干细胞向肾脏 细胞分化的候选因子，还具有阻止肾小管细胞发生凋亡的能力。 本实验通过体外分离、培养、纯化和扩增大鼠骨髓MSCs，并建立单侧输尿 unilateralureterobstruction 管不全梗阻(partial PUUO)大鼠动物模型，将Ad．HGF 和MSCs共同移植入解除梗阻的PUUO大鼠体内，观察MSCs是否能够迁移、分 布、定居到肾脏，并分化为相应的肾脏细胞，以及Ad．HGF对MSCs的影响，为 梗阻性肾病的基因治疗及细胞替代治疗提供一定的理论基础。 材料与方法 MSCs细胞培养与纯化：体外分离、培养雄性SD大鼠MSCs，流式细胞仪 进行CD34、CD90表型鉴定；以不同强度携带绿色荧光蛋白的重组腺病毒 (Ad—GFP)转染MSCs，用流式细胞仪测定转染效率，筛选出最佳转染强度 (MOI) ，并以最佳转染强度将Ad．GFP基因体外转染MSCs。 左肾输尿管上段处置方式不同随机分成5组，正常对照组(6只)；腰大肌包埋组 1 (6只)；套管压迫组(6只)；丝线结扎组(6只)；浸液体石蜡油的丝线结扎组 定输尿管梗阻情况。 后7天解除梗阻，并同时在解除梗阻侧肾脏实质多点注射，A组单纯注射生理盐 于注射术后7天、14天分别处死移植组及对照组大鼠，取双侧肾脏，制作石蜡 切片，利用免疫荧光双标方法检测MSCs在PUUO大鼠肾脏中的分布及分化情 况。 ●士 甲 耋口7R l、骨髓MSCs原代培养7-9天可传代，传代后细胞增殖加快，4．5天可再 次传代；流式细胞仪鉴定结果显示骨髓MSCs中CD90阳性细胞占99％，不表达 CD34。 2、转染强度MOI=400时，转染效率可达85．91％。 3、浸石蜡油的丝线结扎