骨髓间充质干细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响和作用机制研究.pdfVIP

博士论文 中文摘要 骨髓间充质干细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响 及作用机制研究 中文摘要 糖尿病的发病率逐年升高，并呈现年轻化趋势。目前全球糖尿病患者已经达 到2．2亿人，糖尿病已经成为影响人类健康和生活质量的重大疾病。糖尿病分为 两种类型，它们一个共同的特点是胰岛13细胞的减少。目前临床用于13细胞替代 治疗的方法主要有胰腺移植和胰岛移植，但这两种方法都存在供体紧缺和免疫排 斥的缺点，仍不能大规模推广。近年来研究发现胰岛具有再生的潜能，通过促进 自身胰岛再生来治疗糖尿病已经成为研究的一个热点。我们的前期研究发现骨髓 移植能降低糖尿病小鼠血糖，促进糖尿病小鼠胰岛的再生。与骨髓细胞相比，骨 marrow stem 髓间充质干细胞(Bone mesenchymalcell，BMSC)具有扩增能力强、 免疫原性低等优点，是细胞移植的理想来源。本研究首先对比了BMSC和骨髓 marrowmononuclear 单个核细胞(Bone cell，BMMC)对糖尿病小鼠胰岛功能的 影响，观察胰岛再生的途径；然后观察BMSC在糖尿病小鼠体内的转归；最后 阐明BMSC移植后改善糖尿病小鼠胰岛功能的旁分泌机制以及参与胰岛再生的 信号转导通路。 第一部分骨髓间充质干细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响 目的：阐明骨髓间充质干细胞移植对糖尿病小鼠胰岛功能的影响以及胰岛再生的 途径。 随机分成3组，分别为STZ组(尾静脉注射PBS)、BMMC组(尾静脉注射骨 髓单个核细胞)、BMSC组(尾静脉注射骨髓间充质干细胞)，移植后每周检测血 糖变化，移植后1周和6周检测小鼠胰腺形态学、Insulin染色，并统计胰岛数目、 胰岛B细胞数目，并通过检测胰腺组织中BrdU和胰腺干细胞的标记物(BrdU、 PDX．1、Ngn3等)表达情况，了解胰岛再生的途径。 结果：①血糖变化：STZ组小鼠血糖一直呈上升趋势；移植后第4周，BMMC 学意义(∥0．01，tr0．01)；移植后第l周，BMSC组小鼠血糖就出现显著下降 (20．Oa：7．6 博士论文 中文摘要 相比有统计学意义(胙O．01，p0．05)，血糖持续下降至移植后第6周，此时血 组比较无统计学意义(矿0．05)。②胰岛数目变化：移植后l周，STZ组小鼠胰 岛数目为11．3士4．1个；BMMC细胞组小鼠胰岛数目为12．8士5．0个，两组比较差 与STZ组比较差异有统计学意义(胙0．01)，而BMSC组小鼠胰岛数目也显著增 加(26．0士9．4个)，与STZ组比较差异有统计学意义(萨O．01)。③胰岛B细胞变 小鼠胰岛p细胞数也较少(155．3士98．9个)，而BMSC组小鼠胰岛D细胞数较多 移植后6周，STZ组小鼠胰岛D细胞数进一步减少(82．1士33．0个)，而BMMC 计学意义(正0．01)。说明BMSC移植能改善糖尿病小鼠的胰岛功能，促进胰岛 13细胞的再生。④胰腺组织相关标记物的表达：在BMMC组和BMSC组小鼠胰 腺组织中发现胰岛13细胞的增殖，即发现同时表达Insulin和BrdU的细胞；还发 现了胰岛干细胞，如同时表达PDX．1和BrdU，但不表达Insulin的细胞；发现 上述细胞。⑤ZLrNEL染色：在STZ组小鼠胰腺组织中发现较多阳性细胞，即胰 岛凋亡细胞增加，而在BMMC组和BMSC组胰岛中阳性细胞较少，即凋亡细胞 较少。 结论：BMSC移植修复糖尿病小鼠胰岛功能的效果优于BMMC；BMSC移植促进 糖尿病小鼠胰岛再生的途径既包括胰岛细胞自身增殖也包括胰岛干细胞的分化； BMSC移植抑制糖尿病小鼠胰岛细胞凋亡。 第二部分骨髓间充质干细胞在糖尿病小鼠体内的转归 目的：阐明骨髓间充质干细胞在糖尿病小鼠体内的分布及能否转分化为胰岛13细 胞。 质干细胞移植至糖尿病小鼠体内，检测小鼠胰腺中GFP阳性细胞的表达以及GFP 与胰腺发育过程中相关标记物的表达情况。 结果：移植后6周，在受体鼠胰腺组织中可见较多的GFP阳性的细胞，特别是