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牙龈素的致病性及临床意义研究 牙龈卟啉单胞菌是一种Gram阴性厌氧菌，在牙周病患者的龈下菌斑中常被发现，与某些类型牙周病的发生发展紧密联系，它产生的致病因子在牙周组织的侵入，破坏以及逃避宿主防御中发挥重要的作用。牙龈素是牙龈卟啉单胞菌分泌的一种毒性因子最初称为胰酶样蛋白酶（trypsin-like protease，TLP），又称卟啉素（porphypains）。1990年Shah 等从牙龈卟啉单胞菌菌株W83中分离出并证实其为半胱氨酸蛋白酶，它是存在于牙龈卟啉单胞菌的外膜、膜泡或胞外的一组蛋白酶，与粘附有关的蛋白区域或功能区有多样性[1] 。随后的研究发现，牙龈素有两种类型：精氨酸-牙龈素（Arginine-gingipains，Rgps）和赖氨酸-牙龈素（Lysine-gingipains，Kgp）；当感染牙龈卟啉单胞菌时，牙龈素被大量产生，并直接参与牙周病的发生和发展，从而出现牙周病的特征性症状如龈沟液的量增加，中性粒细胞聚集，探诊出血等。下面是在现有研究的基础上，对牙龈素的致病性和临床意义的综述。 牙龈素的分子结构与合成 对牙龈素分子结构已有大量的研究。在牙龈卟啉单胞菌菌株中Rgps可以是110-，95-，70-到90和50-kDa的蛋白，前两种是包含红细胞凝集素的50-kDa亚基的复合体，有或没有粘附区；其他的类型则是单链的蛋白酶；Kpg的主要类型是包含红细胞凝集素和粘附区的60-kDa亚基的复合体。从分子克隆和结构特点来看，Rgps和Kgp分别来源于1704和1722氨基酸前蛋白酶。两者虽然在前体片段上没有相似的结构，但它们反应结构域却部分相同（27%），推测可能是血凝素部分。[2] 综上研究，牙龈素主要效应结构包括与粘附有关的结构和具有蛋白酶作用的区域。 Curtis, M. A.等进一步从基因水平研究发现，编码Rgps和Kgp的基因并没有先前想象的那样复杂，Rgps由两个基因编码，分别负责合成RGP-1和RGP-2，RGP-1和RGP-2有相似的反应结构域，除此之外RGP-1有一个凝血结构域；Kpg由一个单独的基因编码。这三个基因都属于序列相关蛋白酶和血凝素家族。[3]而关于牙龈素的合成，此后有学者研究发现，KGP和RGP-1的合成一样，都是先通过合成包含蛋白酶结构域的多聚蛋白前体，然后通过对特定位点加工合成活化形式。[4]关于两者在活化过程中的相互关系，有人研究发现，RGP的活化不需要KGP，但缺少KGP将会影响RGP的转移或释放。关于RGP在KGP活化过程中的作用尚需进一步的研究。[5]牙龈素结构上的差异同样会影响它们的作用效果和方式。比如关于RGP-1和RGP-2的致病活性，Imamura, T.等的研究发现在牙龈卟啉单胞菌感染中，RGP-1比RGP-2发挥更重要的毒性作用，RGP-1可以在钙离子的作用下直接与磷脂结合，由此显著的提高了其活性。[6] 牙龈素的致病机制 牙周致病微生物发挥主要包括以下四个方面：牙周定植、存活和繁殖，入侵宿主组织，抑制和逃避宿主的防御功能，损害宿主牙周组织。下面我将根据现有的研究条件，对牙龈素在牙龈卟啉单胞菌致病过程中发挥的作用进行综述。 关于牙周定植、存活和繁殖： 牙龈卟啉单胞菌在牙周组织的定植、存活和繁殖是进一步发挥致病作用的基础。从牙龈素分子结构中与粘附有关的区域，我们可以推测牙龈素可能会有助于Pg在牙周组织的粘附定植。McAlister, A. D.等研究发现在口腔的液体流动环境中，牙龈素优先与固定状态的细胞外基质蛋白结合，由此促使牙龈卟啉单胞菌能很好的定植于宿主的口腔中，为进一步发挥致病作用创造条件。[7] 除此之外，我认为牙龈素对牙周组织的防御功能的抑制及组织的破坏，同时给其他类型的牙周致病菌的定植、存活和繁殖提供了极为良好的条件。有人研究发现在牙周的混合感染中，牙龈卟啉单胞菌和福赛坦氏菌的混合感染在牙周脓肿形成中有协同效应；通过研究不同变异型的牙龈卟啉单胞菌和福赛坦氏菌的混合感染，发现牙龈素在这种协同作用的过程中发挥着重要的作用。[8] 关于入侵宿主组织： 牙龈卟啉单胞菌侵入宿主的牙周组织首先通过龈沟内的上皮屏障，研究发现，牙龈素能直接作用于结合上皮，降解细胞之间的连接，破坏结合上皮结构和功能的完整性。[9]Groeger, S.等通过体外实验发现牙龈卟啉单胞菌能破坏牙龈上皮的屏障功能，通过使用牙龈素特异性酶抑制剂的作用能延缓上皮屏障功能的破坏。[10]综上研究，牙龈素能破坏上皮屏障，为牙龈卟啉单胞菌侵入牙周组织进一步发挥致病作用创造了条件。 关于抑制和逃避宿主的防御功能： 在致病微生物侵入时，机体牙周组织会通过一些防御机制来抑制和阻止微生物的入侵，不过牙龈卟啉单胞菌等细菌却能逃避或抑制宿主的防御组织进一步发挥致病作用。研究发现牙龈素能干扰宿主免疫反应，影响中性