培哚普利对肾性高血压大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1影响.docVIP

培哚普利对肾性高血压大鼠心肌纤维化及转化生长因子β1影响摘要：目的 探讨培哚普利对肾性高血压大鼠心肌纤维化作用及对转化生长因子-β1表达影响。方法 建立双肾一夹肾血管性高血压(21＜1C)大鼠模型，将24只实验大鼠随机分为假手术组、高血压组、培哚普利组，术后4周末开始灌胃培哚普利片2mg/(kgd)。共8周。测量大鼠尾动脉收缩压、心脏重量／体重、心肌胶原容积分数(CVF)、血管周围胶原容积分数(PVCA)及转化生长因子β1/sub(7GF-β1的表达。结果 和假手术组相比，高血压组的收缩压、心脏重量／体重、CVF及PVCA显著增加(P＜0.01)，TGF-β1表达上调(P＜0.01)。和高血压组相比，培哚普利组心脏重量／体重、CVF、PVCA及TG-β1的表达降低(P＜0.05)。结论 培哚普利可以减轻肾性高血压大鼠心肌纤维化，其机制可能与下调TGF-β1有关。 关键词：心肌纤维化；转化生长因子β1；培哚普利 中图分类号：R544.1　R255.3　文献标识码：A　文章编号：1672-1349(2007)12-1212-03 心脏是高血压最常损害的靶器官之一，主要表现为左心室肥厚，组织学上即为左室重构。心肌纤维化是高血压左室重构的主要表现之一，可引起心脏舒张功能减退、心肌僵硬度增加、心肌缺血和室性心律失常。因此，逆转心肌纤维、改善心肌重构是高血压治疗的重要目标和热点之一。在影响心肌纤维化的细胞因子中，转化生长因子-β1(TGF-β1被证实与细胞外基质积聚关系密切，是器官纤维化标志物。本实验通过观察血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)培哚普利对肾血管性高血压(RH)大鼠心肌的胶原容积分数(CVF)，血管周围胶原面积(PVCA)及TGF-β1的影响，进而探讨其抗RH大鼠心肌纤维化作用及可能机制。 1　资料与方法 1．1 材料 健康清洁级wistar雄性大鼠24只，OlympusBX-15型光学显微镜及B1―2000医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司)由山西医科大学生理教研室提供。培哚普利片购于法国施维雅(天津)制药有限公司。免疫组化试剂均购自Santa Cruz公司。 1．2 模型的制作及分组 Wistar雄性大鼠，体重(200±20)g，随机分为假手术组、高血压组及培哚晋利组，每组8只。采用双肾一夹(2KIC)经典造模法复制RH大鼠模型。用5％水合氯醛按100g体重1mL进行腹腔内注射麻醉，行腹正中切口切开腹壁，游离左肾动脉并用内径为0.25mm银夹钳夹，使左肾动脉部分狭窄，右侧肾动脉不触及。假手术组方法相同，但不安置银夹。术后4周末测定尾动脉血压，凡尾动脉收缩压高于20kPa者确定为高血压形成。培哚普利组于4周末给予培哚普利2mg/(kgd)灌胃，一次性给药，假手术组和高血压组给予等量的蒸馏水灌胃。给药8周后测量大鼠尾动脉收缩压，处死大鼠进行其他指标的检测。 1．3 指标检测 1．3．1 心重指数测定 剔除筋膜等结缔组织的心脏，洗净，称取全心脏湿重(8)，除以大鼠体重(kg)，为心重指数。 1．3．2 心肌胶原组织学测定(Van Gieson法) 石蜡切片常规蜕蜡至水，1％酸性品红和0.5％的饱和苦味酸染色。在VG染色下，心肌细胞呈黄色，胶原呈红色。采用BI-2000型医学图像分析系统，测量心肌CVF和PVCA。CVF：胶原面积／总面积。PVCA=小动脉管腔周围胶原面积／动脉管腔面积。在光镜下，任选取4个视野，以视野中所有胶原面积之和(不包括血管周围胶原面积)除以心肌纤维和结缔组织面积总和，得出CVF。每张心肌切片任选取4个壁内小动脉，计算PVCA。 1．3．3 免疫组织化学法(PV－6001法)及图像分析法检测TGF-β1取石蜡切片常规脱蜡入水，3％H2O2处理10min阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗，高压修复2 min，PBS冲洗，滴加兔多抗IgG(浓缩型兔多抗1gG，工作抗体浓度为1:200)，4℃过夜，PBS冲洗。滴加山羊抗兔lgG抗体-HRP多聚体37℃恒温箱孵育30min，PBS冲洗，DAB显色液显色，苏木精复染，脱水，透明，封固。同时磷酸盐缓冲液代替一抗作阴性对照。免疫组织化学图像分析经标准灰度校正后随机取5个视野(×400倍)，以平均灰度的大小表示抗原的含量，灰度越小，表示抗原含量越大。 1．4 统计学处理 所有数据以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析，并用LSD法进行两两比较。应用SPSS13.0统计软件进行数据处理，P＜0.05为有统计学意义。 2 结 果 2．1 各组血压及心重指数(见表1) 2．2　各组CVP，PVCA及TGF-β1比较 VG染色比较：假手术组血管周围胶原纤维呈淡红色，非连续性分布；培哚普