内皮源性一氧化氮对肝硬化门静脉高压症内脏动脉RhoA%2fROCK信号通路影响机制地研究.pdf

中文摘要 内皮源性一氧化氮对肝硬化门静脉高压症内脏动脉RhoA/ROCK 信号通路影响机制的研究 第一部分 肝硬化PHT 大鼠NO 水平和肠系膜微动脉收缩反应性的变化 目的：研究肝硬化PHT 大鼠和非PHT 大鼠血清和肠系膜动脉NO 水平变化以及 肠系膜微动脉对去甲肾上腺素的反应。方法：制备肝硬化大鼠模型，并设对照组，分 别测定门静脉压力、血液和肠系膜动脉中NO 的含量。分离第三级微动脉，分别利用 单根或串联血管灌流系统测定肠系膜微动脉去内皮前后对去甲肾上腺素的反应。结 果：①肝硬化PHT 组大鼠门静脉压力平均为（14.7±2.1）mmHg ，远高于对照组大鼠 （6.6±1.3 ）mmHg （P0.01 ）。②肝硬化PHT 大鼠血清NO 浓度平均为（76.1±11.6 ） μmol/L，远高于对照组大鼠（48.7±6.6 ）μmol/L （P0.01 ）。③肝硬化大鼠肠系膜动脉 NO 含量平均为（376.8±63.2 ）μmol/gprot ，远高于对照组大鼠（215.3±38.1 ）μmol/gprot （P0.01 ）。④与对照组比较，肝硬化PHT 大鼠的离体肠系膜微动脉对去甲肾上腺素 剂量反应曲线右移，EC50 增大（P0.01 ）。⑤肝硬化PHT 大鼠的离体肠系膜微动脉能 使下游去内皮正常鼠微动脉对去甲肾上腺素剂量反应曲线右移，EC50 升高（P0.01 ）。 结论：肝硬化PHT 大鼠血清和肠系膜动脉内NO 含量明显升高，同时肠系膜微动脉 对去甲肾上腺素的反应性明显降低，这与 PHT 大鼠肠系膜动脉内皮增加或减少释放 某些血管活性物质有关。 第二部分、肝硬化PHT 大鼠肠系膜动脉NO/cGMP/PKG 和RhoA/ROCK 通路相关蛋白的表达 目的：通过比较肝硬化 PHT 大鼠和对照组肠系膜动脉 NO/cGMP/PKG 和 RhoA/ROCK 通路相关蛋白及酶活性的改变，探讨上述两条通路在PHT 大鼠肠系膜动 脉对去甲肾上腺素收缩低反应中的作用。方法：应用免疫印迹法分别检测 NO/cGMP/PKG 和 RhoA/ROCK 通路中 eNOS 、PKG 、p-vasp 、RhoA、ROCK- 1 和 p-moesin 蛋白量的变化。结果：①与对照组大鼠相比较，肝硬化PHT 大鼠的肠系膜 动脉 eNOS 和 p-vasp 蛋白量表达明显升高（P0.01 ），而PKG-1 蛋白量无明显变化 （P0.05 ）。②与对照组大鼠相比较，肝硬化PHT 大鼠的肠系膜动脉RhoA、ROCK -1 和p-moesin 蛋白量均无明显变化（P0.05 ）。结论：肠系膜动脉eNOS 是肝硬化PHT 大鼠NO 产生的重要来源，在NO 作用下，PKG 虽然蛋白含量未发生变化，但其活 性增加，然而RhoA/ROCK 信号通路中ROCK 蛋白酶的含量和活性未发生变化。 II 内皮源性一氧化氮对肝硬化门静脉高压症内脏动脉RhoA/ROCK 信号通路影响机制的研究 中文摘要 第三部分、内皮源性NO 对肝硬化PHT 大鼠肠系膜微动脉去甲肾上腺素 反应性的影响 目的：抑制肠系膜动脉eNOs 合成 NO ，降低动脉内皮细胞和管壁NO 的含量， 探讨NO 对肝硬化PHT 大鼠肠系膜动脉反应活性的影响。方法：肝硬化PHT 大鼠模 型建立后，分别经胃管注入生理盐水和L- NAME （0.5mg/kg/d ）共14 天，并设立正 常对照大鼠。术中测定门静脉压力，血液和肠系膜动脉中NO 的含量。分离第三级微 动脉，分别利用单根或串联血管灌流系统测定肠系膜微动脉去内皮前后对去甲肾上腺 素的反应。结果：①肝硬化PHT 大鼠经L- NAME 处理后，其门静脉压力显著升高， 也高于正常对照大鼠（P0.01 ）。②肝硬化PHT 大鼠经L- NAME 处理后其血清NO 浓度平均为（45.3±9.2 ）μmol/L，显著低于未经L-NAME 处理的PHT 大鼠（82.1±15.8 ） μmol/L （P0.01 ），与正常对照大鼠 （42.9±5.3 ）μmol/L 无差异。③肝硬化大鼠经 L- NAME 处理后其肠系膜动脉 NO 含量平均为（215.8±4