蛇足石杉内生真菌地分离筛选与培养条件对生物碱含量地影响.pdfVIP

目 录 目 录 摘 要 i ABSTRACT iii 第1 章 绪 论 1 1.1 蛇足石杉生物及生态学特性 1 1.1.1 形态特征 1 1.1.2 分类及主要变异类型 1 1.1.3 生态学特性 2 1.1.4 繁育与组培 2 1.2 蛇足石杉有效成分及药用价值 3 1.2.1 功效及重要有效成分 3 1.2.2 Hup A 作用机理及类似物的合成 3 1.3 植物内生真菌产生物碱的研究 4 1.3.1 内生真菌产生物碱的研究 5 1.3.2 内生真菌产石杉碱的研究 5 1.3.3 内生真菌产生物碱应用及展望 6 1.4 产石杉碱甲内生真菌分离筛选立题依据与意义 6 第2 章 蛇足石杉内生真菌的分离纯化和鉴定 8 2.1 材料 8 2.1.1 供试材料 8 2.1.2 培养基 8 2.1.3 仪器与试剂 8 2.2 方法 8 2.2.1 外植体消毒 8 2.2.2 内生真菌的分离及纯化培养 8 2.2.3 内生真菌液体培养及特征 9 2.2.4 内生真菌基因组DNA 的提取 9 2.2.5 ITS( 内转录间隔区)序列的 PCR 扩增 9 2.2.6 PCR 产物检测 9 2.2.7 PCR 产物纯化及序列测定 10 2.2.8 序列测定结果分析与构建系统发育树 10 第 I 页 目 录 2.3 结果与分析 10 2.3.1 外植体消毒效果 10 2.3.2 内生真菌的分离纯化 10 2.3.3 内生真菌长势与菌落形态特征 11 2.3.4 液体培养生长特点 12 2.3.5 PCR 产物电泳成像检测 12 2.3.6 ITS 序列测定 13 2.3.7 序列分析及构建系统发育树 15 2.3.8 蛇足石杉内生真菌类群组成 17 2.4 结论与讨论 18 第3 章 产Hup A 内生真菌的检测及筛选 20 3.1 材料 20 3.1.1 供试菌株 20 3.1.2 培养基 20 3.1.3 仪器与试剂 20 3.2 方法 20 3.2.1 菌株活化及培养 20 3.2.2 内生真菌总生物碱的提取 20 3.2.3 产 Hup A 内生真菌初步检测及筛选 20 3.2.4 建立和优化 Hup A 检测体系及 HPLC 复筛 21 3.3 结果与分析 21 3.3.1 TLC 检测 21 3.3.2 HPLC 初次检测 23