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2 3 尿道下裂差异表达miRNA 的筛选研究 中文摘要 尿道下裂差异表达miRNA 的筛选研究 中文摘要 目的 本研究通过筛选尿道下裂包皮组织中差异表达的miRNA ，探讨miRNA 及其靶 基因和信号通路在尿道下裂的发病机制中的作用，寻找尿道下裂预防和治疗的新靶 点。 方法 收集9 例尿道下裂患儿及3 例包茎患儿的包皮组织作为研究对象，其中3 例尿道 下裂患儿术前接受过HCG 治疗。分别在组织中抽提总RNA ，对总RNA 进行质量检 测，利用丹麦Exiqon 公司研制的芯片筛选差异性表达的miRNA ，同时采用RT-PCR 方法对芯片结果进行验证。进一步结合生物信息学方法对 miRNA 的靶基因进行预 测，并应用DAVID 数据库进行靶基因功能富集分析和信号转导通路富集分析。探讨 总结与尿道下裂发病、治疗和预后相关的miRNA 及其调控机制。 结果 1. miRNA 芯片技术筛选结果：选择差异倍数两倍以上、P 值0.05 的差异表达 miRNA 进行聚类分析。与包茎患儿比较，尿道下裂患儿包皮组织中表达上调的 miRNA 共19 个，表达下调的miRNA 共15 个。对尿道下裂患儿术前是否应用HCG 治疗也做了对比分析，术前应用药物较未应用药物患儿包皮组织中表达上调的 miRNA 共 25 个，表达下调的 miRNA 共 19 个。进一步对所有包皮组织差异表达 miRNA 进行综合分析发现部分 miRNA 形成在尿道下裂组低表达，而在包茎和尿道 下裂术前应用药物治疗组高表达。 2. RT-PCR 验证结果：选择差异表达的 10 个miRNA 进行RT-PCR 验证，其中5 个miRNA 得到验证，其差异表达趋势与芯片结果相符，分别为let-7b-3p、miR-145-5p、 miR-376a-3p、miR-377-3p、miR-1-3p 。 3. 生物信息学结果：let-7b-3p、miR-145-5p、miR-376a-3p、miR-377-3p、miR-1-3p I 中文摘要 尿道下裂差异表达miRNA 的筛选研究 可能与尿道下裂发病相关，靶基因为SOX9、FGF14 、FGFR2 、TCF7L2 、ZEB2 、PAX3 、 SOD1、ZFPM2 、THBS1、PAX6 、SMAD4、DMRT2 等，其功能与胚胎发育、腺体发 育、性别分化和伤口愈合等相关，相关信号通路为MAPK 信号通路、TGFβ 信号通路、 Wnt 信号通路、钙信号转导通路和前列腺癌相关信号通路等。 结论 1. 首次建立尿道下裂miRNA 基因表达谱，筛选出差异表达的miRNA ，在尿道 下裂与包茎、术前是否用药物治疗的尿道下裂间获得差异表达 miRNA ，并推测 miRNA 表达趋势。 2. 通过构建特异性茎环RT 引物，采用实时定量PCR 技术，验证了10 个差异表 达miRNA ，其中5 个miRNA 的RT-PCR 结果与基因芯片结果相符。 3. 预测5 个miRNA 的靶基因，并进行靶基因功能分析，总结与尿道下裂相关的 miRNA 及其作用机制。 关键词：尿道下裂，miRNA ，基因芯片，RT-PCR 作