斑玉蕈β-葡萄糖苷酶基因的序列分析及皂苷对基因表达的影响.pdfVIP

食用菌学报© 2017.24(1): 1〜6 D 0 1 ：1 0 .1 6 4 8 8 /j.c n k i.l0 0 5 - 9 8 7 3 .2 0 1 7 .0 1 .0 0 1 斑玉蕈 p-葡萄糖苷酶基因的序列分析及皂苷 对基因表达的影响 陈 辉 u ，冯志勇s 冯 川 s 陈明杰s 汪 虹 s 王 倩 s 宋晓霞s 赵 姘 s 叶 明 2,张津京〃 p 上海市农业科学院食用菌研究所，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心， 国家食用菌加工技术研发分中心，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上 海 201403; 2合肥工业大学食品科学与工程学院，安徽合肥 230009) 摘 要 ：通 过 转 录 组 测 序 获 得 了 斑 玉 蕈 marmoretiWSIEFSISS 菌株的卩-葡萄糖苷酶基因的cDNA 序列（命 名 为 bg /1 ), 采用荧光定量 P C R 检 测 b g /1 的相对表达量。当 P D B 中加入0.05 g / L 的皂苷溶液，菌丝 培养 4 〜6 d 时，bg/1 相对表达量降低了 1 /2 左右 ( 相比对照），8 d 开始升高，第 1 0天为对照组的 1 .8 倍 ；向工厂 化生产用的栽培瓶(接种培养 85 d 后搔菌处理）中添加 0.05 g / L 的皂苷溶液 15 m L ,可缩短子实体采收时间约 3 d ( 与对照组相比），在此过程中bg/1 相对表达量在第5 天时最低 ,20 d 时超过对照组,5 d 时为对照组的 1.66倍 。 关键词 ：斑玉蕈；皂苷；卩-葡萄糖苷酶；基因表达 斑 玉 蕈 又 名 真 姬 燕 、蟹味燕，该菌味道鲜美、肉厚质嫩、口感甚佳，在日本有 “香在松茸，味在玉蕈”之说，很受消费者的青睐[1]。斑玉蕈是中国已经实现工厂化生产的主要食用菌之 一 ，产量仅次于金针燕（柯ammwZina veZwiipaj )和刺斧侧耳 （HewraiiM eryngii ) ，但是，斑玉蕈从接种到商品 子实体采收的生产周期长达1〇〇〜120 d ，约为金针菇、刺芹侧耳和柱状田头菇（Agracybe aegehte )的两倍， 因此工业化生产的效率相对较低[2]。斑玉蕈栽培周期长主要是因为其独特的生理特点，即从菌丝生长向 子实体生长转化前必须经过60〜70 d 的菌丝体后熟阶段，如果后熟阶段时间偏短，子实体产量会下降[3]， 目前研究认为后熟阶段可能是菌丝储存能量的过程，将为子实体生长提供足够的营养[2_3]。在糙皮侧耳 (P . 中，可外源添加皂苷诱导子实体提前形成[4]。|3-葡萄糖苷酶是纤维素酶系的重要成员，其酶 活性的高低是纤维素降解效率的关键。在对里氏木霉CKc/jodmna reayeO突变株 QM9414以及 M 8 的研 究中发现，|3_葡萄糖苷酶的合成分泌与其对纤维素的降解有关，其表达量与菌丝生长密切相关[5];另外，|3_ 葡萄糖苷酶是一种诱导酶类，其表达合成受胞外碳源种类的调控[6]。 笔者前期研究发现搔菌后外源添加皂苷可缩短斑玉蕈栽培周期，同时影响了基质代谢中的纤维素 酶活性[7]。本研究通过外源添加皂苷，首先研究皂苷对斑玉蕈子实体发育进程的影响，进一步研究其 |3_葡萄糖苷酶基因表达的规律，探讨皂苷缩短斑玉蕈栽培周期的机制。 1 材料与方法 1. 1 菌株 斑玉蕈（H . marmorei«) SIEF 3133为上海市农业科学院食用菌研究所选育保藏的工厂化栽培 菌株。 1.2培养基和主要试剂 P D A 和 P D B 培养基均购自美国 B D 公司；栽培培养基（木屑培养基）的配方和制作参照参考文献 * * 收稿日期：2016-06-2 3 原稿；2016-07-2 5 修改稿 基金项目：国家青年科学基金项目 、上海市市级农口系统青年人才成长计划[沪农青字 (2016)第 1-11号] 、上海市科技兴农重点攻关项目[ 沪农科攻字(2013)第 5 - 1 0 号]和上海市科学技术委 员会科研计划项目资助 作者简介：陈 辉 （ 1981 - ) , 男 ，硕士，助