晶状体上皮细胞中OREBP的表达、活性和对细胞凋亡的作用.pdfVIP

·中文论著摘要· 晶状体上皮细胞中OREBP的表达、活性及对细胞 凋亡的作用的初步研究 前 言 维持渗透压稳定对于保持晶状体透明性有重要意义，且渗透压的改 变是细胞凋亡的原因之一。渗透压反应元件结合蛋白(osmoticresponse element binding 在高渗条件下，在高渗条件下转为至细胞核内，结合至下游基因的渗透 压反应元件部位，通过顺式调节，促进小分子渗透压物质的合成与利用， 从而保持细胞内渗透压稳定。 晶状体是无血管的组织，终末分化阶段的纤维细胞完全依赖晶状体 上皮细胞维持其代谢和离子交换。OREBP的调节功能异常，可表现为晶 状体混浊的形成。渗透压反应元件结合蛋白在多种细胞、组织中有表达， 是调节渗透压的重要调节蛋白。它调控目的基因，促进细胞内渗透压物 质的合成和转运，对抗外界渗透压的变化。同时也调控HSP70，尿素转 运子UT-^等基因，并在高渗刺激下促进他们表达。目前已知，渗透压反 应元件结合蛋白mRNA在多种培养的细胞核组织中均有表达。 渗透压反应元件结合蛋白含有DNA结合域和反式活化域。OREBP通 过DNA结合域结合至一些基因的5’渗透压反应元件，其反式活化域调 节这些基因的转录效率，从而调节下游基因的表达。在细胞培养实验中， 超表达缺乏反式活化域，只包含DNA结合域的截断型OREBP，会竞争性 抑制正常内生性OREBP与所调控基因的表达，表现为显性失活作用。目 前的研究普遍认为晶状体上皮细胞的凋亡与白内障的发生有重要关系。 我们认为高渗培养细胞可以导致细胞凋亡，有机分子物质积聚可以阻止 这一过程。基因敲除OREBP的小鼠肾小管细胞脱水后，显示细胞活性的 下降。 mRNA表达水平及 本实验拟研究高渗条件下，晶状体上皮细胞OREBP 其活性变化；与超显性活性抑制ORBEP后，对晶状体上皮细胞的细胞凋 亡的影响。关注于渗透压对于白内障的影响，此即为本课题的出发点 研究方法 1．样本总RNA提取：使用TRIZOL，按照说明书操作 2．反转录反应：使用试剂盒，按照说明书操作 3．Real-time RT-PCT反应 4．PCR反应 5．酶切 6．感受态细胞的制备与转化 7．质粒提取 8．细胞转染 统计学分析：采用SPSSl6．0统计分析软件进行独立样本T检验，P 0．05为有统计学意义。 编结 禾果 当渗透压由等渗变为高渗状态时，晶状体上皮细胞中OREBPmRNA表 达量增高；通过对其下游调控蛋白HSP70-2的检测，间接反映高渗条件 表达了明显下降，说明OREBP活性明显被抑制；而失去部分活性的晶状 体上皮细胞相较对照组，细胞凋亡率增高。 缩结 论f匕 渗透压对于晶状体上皮细胞是十分重要的。高渗不仅引起ORBEP表达 量增高，其活性也增强。说明在晶状体上皮细胞是可以忍受部分渗透压环 境的变化的，等渗条件下，无明显变化。当超显性抑制OREBP后，OREBP活 性收到抑制，其凋亡率较对照组增加，说明OREBP对于晶状体上皮细胞抵 2 抗渗透压所致损伤有保护作用。通过对ORBEP的研究，临床上我们更应该重 视前房内环境的稳定性，从而对渗透压变化引起的白内障的治疗找到更 好的防治办法。 关键词 晶状体上皮细胞，渗透压反应元件结合蛋白，细胞凋亡 3 ● 英文论著摘要 ● TheOREBP anditsinfluence expression，acitity 。lense ellUm of nimuilehtip tOsi,ctpaP0ptosISop