水杨酸对人角质形成细胞丝聚蛋白及激肽释放酶7表达的影响.pdfVIP

本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含 为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 雄． 签字日期： 垃年丘月逸日 目 录 一、摘要……………………………………………………………………1 (一)中文摘要…………………………………………………………1 (二)英文摘要………………………………………………………3 二、正文…………………………………………………………………5 (一)前言………………………………………………………………5 (二)材料与方法………………………………………………………6 (三)结果……………………………………………………………10 (四)讨论……………………………………………………………14 (五)结论……………………………………………………………17 (六)参考文献………………………………………………………18 三、文献综述……………………………………………………………19 (一)综述…………………………………………………………l9 (二)参考文献………………………………………………………24 四、致谢…………………………………………………………………29 水杨酸对人角质形成细胞丝聚蛋白和 激肽释放酶7表达的影响 硕士生姓名： 赵丹 指导教师： 涂彩霞教授 指导小组： 涂彩霞教授 专业名称： 皮肤病与性病学 摘要 背景和目的： 特应性皮炎(atopic 同程度的皮肤瘙痒、干燥脱屑及炎症反应。越来越多的研究表明皮肤屏障功能异 常在特应性皮炎的发病机制中具有重要作用。丝聚蛋白(FLG)是完整的皮肤屏障 和表皮水化功能必不可少的分化蛋白。FLG的缺乏及基因突变可以破坏皮肤屏障， 引起皮肤干燥而导致瘙痒，变应原易于进入。人组织激肽释放酶7(KLK7)的作用 是参与皮肤细胞脱落过程，同时在其他的皮肤病理生理学如角化，炎症等过程中 发挥作用。特应性皮炎KLK7表达水平明显增高，引起脱屑及瘙痒。 本研究通过测定不同浓度的水杨酸对人角质形成细胞中FLG和KLK7的影 响，探讨水杨酸对表皮屏障功能的影响，从而为临床上水杨酸对治疗特应性皮炎 提供实验依据。 方法： 不同浓度的水杨酸作用于人角质形成细胞(HKC)24h，采用MTT法检测人角 质形成细胞的细胞存活率以确定水杨酸的无毒剂量。在无毒剂量范围内，采用不 空白对照组(用培养基代替药物)，培养24h后收集细胞或上清液，分别用S-P 免疫组化方法检测人角质形成细胞中FLG的表达水平，用ELISA方法检测HKC 上清液KLK7的水平，用RT．PCR方法检测FLG和KLK7mRNA的表达水平。各 组数据采用单因素方差分析进行统计学比较。 结果： 酸浓度作用HKC 组(100％)相比无显著差异(胗O．05)。因此，后续实验水杨酸的浓度确定为 50099／ml，5099／ml，599／ml，0．599／ml。 2．S-P免疫组化方法检测水杨酸对HKC中FLG表达的影响：与阴性对照组 (尸0．01)。 3．RT．PCR方法检测水杨酸对HKC中FLGmRNA表达的影响：与阴性对照 水杨酸对HKC细胞FLG的mRNA表达均有促进作用 统计学意义(火0．01)。 4．ELISA方法检测水杨酸对HKCKLK7表达水平的影响：与阴性对照组 KLK7 杨酸对HKC中 的蛋白表达均有抑制作用 (0．1017+0．01830