56肾切除大鼠肾脏血管内皮细胞转分化和netrin-1肾脏保护作用的研究.pdfVIP

·中文论著摘要· 5／6肾切除大鼠肾脏血管内皮细胞的转分化及 netrin。1肾脏保护作用的研究 刖舌 尽管肾脏疾病的根底疾病不同：l肾小球肾炎、糖尿病肾病、高血压肾病、药 物性肾病等，但一旦肾脏损伤达到一定程度，肾脏疾病的进程多是进行性的，不 可逆的，独立于原发损害。肾间质的纤维化(renal 毛细血管网的丢失，进而肾小管的萎缩、肾小球的硬化是终末期肾病(end．stage renal disease，ESRD)的共同途径。以往针对肾间质纤维化的研究，多集中于肾小 管上皮细胞、间质细胞活化、粘附因子的表达、炎症细胞的浸润。近年来肾脏微 血管内皮细胞的损伤和修复，微血管病变和肾间质慢性缺氧及纤维化的关系已经 得到国内外学者的共识。肾问质微血管主要指源于出球小动脉并分布于肾小管周 围的毛细血管，即肾小管周围毛细血管(Peritubular capillary，PTC)，肾小管周围 毛细血管在维持肾小管正常的结构和功能起关键作用。近年来的研究提出，在多 种肾病中，无论病因如何，均存在肾间质微血管病变，PTC分布紊乱减少，而且 PTC减少程度与肾间质纤维化呈正相关。因此如何解决PTC丢失，保护肾脏微血 管内皮细胞是治疗肾间质纤维化的重要环节。 肌成纤维细胞的超微结构介于成纤维细胞和平滑肌细胞之间，比普通的成纤 维细胞具有更强的增殖和分泌胶原的能力，是促成肾脏及其它器官纤维化的重要 因素，而且其在纤维化部位持续存在。近来发现在心肌纤维化和肺纤维化过程中， traJlsition， 内皮细胞可以向肌成纤维细胞转分化(endothelial．mvo胁roblast EndoMT)发挥了重要作用。在慢性肾脏病进展过程中是否存在内皮细胞向肌成纤 维细胞的转化，从而加重肾问质纤维化的发生发展，这是向肾脏工作者提出的新 的研究方向。 蛋白样分子，具有明确的主要组织区域，属于层粘连相关家族中的轴突导向分子。 在神经系统中其经典的作用是通过与其受体DCC和UNC5H结合引导神经轴突的 生长与诱导生长锥的的迁移。近来有学者发现，由于神经和血管分支走向的高度 相似性，引导神经定向生长的轴突导向因netrin．1也能诱导血管的新生。体内、体 外的研究表明netrin一1是内皮细胞的促有丝分裂原，能够促进内皮细胞迁移和增 殖，发挥诱导血管新生的作用，netrin．1是白细胞吸引的潜在抑制剂，能够抑制粘 膜缺氧导致的炎症反应。为应用netrin．1保护血管内皮细胞，修复PTC，改善肾 间质纤维化，延缓肾脏病进展提供契机。 5／6肾切除的典型病理改变为肾小球硬化、肾间质纤维化，表现与人类肾脏纤 维化相一致的病理过程。是研究慢性肾脏病、肾纤维化的理想动物模型。 本实验从以下三个方面进行了研究：①netfin．1在正常大鼠。肾脏的表达定位、 在5／6肾切除中大鼠肾组织中的变化及其与管周毛细血管网之间的关系；②I肾脏 血管内皮细胞是否可以向肌成纤维细胞转分化；③netrin一1对5／6肾切除大鼠肾脏 的保护作用及可能机制。 材料与方法 第一部分：雄性sD大鼠48只，随机分为2组：①模型组(n=24只)大鼠行 10％水合氯醛腹腔注射麻醉(3ml／蛭)后，俯卧位固定于手术台上，从距左脊肋骨 1．5厘米处斜向外方切口，暴露左肾，分离肾周围脂肪囊后，弧行切除肾上下极各 1／3，用明胶海绵压迫止血1分钟，复位肾脏，缝合。1周后切除整个右肾，2次 共切除5／6肾脏；于造模后第4、8、12周分别处死大鼠8只。②假手术对照组(n=24 只)仅以水合氯醛腹腔注射麻醉后暴露并剥离肾包膜，不做肾切除。于造模后第 4、8、12周分别处死大鼠8只。大鼠在处死前留24小时尿蛋白定量，处死时留 取血及肾组织标本。血标本作血尿素氮、血清肌酐检测；尿标本行24小时尿蛋白 定量；肾组织石蜡切片常规HE和Masson染色观察肾脏组织病理改变，电镜观察 肾小管周围血管内皮细胞的超微结构变化。应用免疫组织化学技术观察各组、各 时问点大鼠肾组织netrin．1、PTC密度、HIF．10【表达情况；Westemblot技术检测 netrin．1、HIF．1 0【蛋白