老年短暂性脑缺血发作PAC-1、CD62P及颈动脉粥样硬化的关系.pdfVIP

老年短暂性脑缺血发作与PAC．1、CD62P和颈动脉粥样硬化的关系 研究生：李蓬生 专业：老年医学 导师：刘焕星 教授 中文摘要 在正常人体循环系统中，血液中的血小板都是未激活，多数处于静息状态的水平。 血小板发生活化是静息状态下的血小板在受到各种物理、化学或生物因子的作用下， 使得血小板受到刺激而被激活成为活化的血小板。只有静息状态下的血小板发生活化 后，血小板才能发生粘附、变形、聚集、释放等一系列的生理过程，形成斑块，最终 导致血栓的形成。血小板糖蛋白的种类较多，其中最主要的糖蛋白是PAC—l和CD62P 两种。上述两种糖蛋白的生理作用分别是，PAC．1是纤维蛋白原受体，它主要是参与 纤维蛋白原的结合，促使血小板产生聚集反应。CD62P则是通过介导血液中的细胞 与细胞之间(如中性粒细胞、单核细胞与血小板或内皮细胞)发生相互的粘附、聚集 的过程，以上两种糖蛋白在形成血栓和血液细胞之间的炎症反应中起到重要的作用。 当血小板发生活化后，血小板糖蛋白表面的CD62P、PAC一1表达能力比原来明显增 强，并且成为血小板活化的标志物。本实验通过流式细胞术来检测血小板膜上的 CD62P、PAC．1的阳性表达率，我们可以了解到血小板活化的程度。 在本实验中，我们通过检测老年TIA患者的PAC．1、cD62P活化水平进行分析和 研究，同时行颈动脉血管彩超检查，分别来观察老年TIA患者血小板活化程度的变 化及伴有颈动脉粥样硬化各项指标的变化。进一步分析老年TIA患者活化的血小板 水平伴有颈动脉粥样硬化发病中的作用，并且通过实验再次证实血小板活化标志物 CD62P、PAC一1的表达情况，并与健康对照组比较，明确老年TIA伴颈动脉粥样硬化 与血小板活化之间的关系，为预防TIA的发生及再发、干预TIA病程进展寻找新的 方法。 一．材料和方法： 研究对象： 与泰安市中心医院查体中心合作，系20lO年度泰安市老干部健康查体信息资料 中，从中选取正常体检者50例。男性32例，女性18例，平均年龄为65．4士6．9岁。 1 健康对照组。健康对照组中，正常体检者均要求排除既往患有心、脑血管疾病，呼吸、 消化系统疾病，泌尿系统疾病、高血压病，糖尿病，慢性感染，肿瘤疾病，风湿免疫 性疾病，近期手术、活动性出血及有出血倾向等疾病病史的查体者。并给予常规辅助 检查项目，如血常规，肝、肾功，血脂，血糖，凝血系统，大、小便常规，心电图， 胸片等检查结果均未见明显异常。 老年TIA组。 排除标准： 1．既往患有糖尿病，急性脑血管病，心房颤动等心源性梗塞疾病。 2．患者入院前2周服用过阿司匹林，氯吡格雷，肝素等影响血小板功能此类的 药物。 3．既往有食管，胃底静脉曲张或活动性溃疡的疾病等。 血小板活化蛋白的检测： 各抽取肘前静脉血1次，分别用于检测血小板活化蛋白CD62P、PAC一1各时间段的活 化水平。 实验方法： 老年TIA患者入院后，采集血标本时必须使用一次性采血针，每次抽取静脉血均 要求一针见血。所有受试者次日晨起后空腹，选择穿刺肘正中静脉，抽取静脉血约2ml， 为防止血小板发生活化，抽血时不予扎止血带。为防止血液凝固，影响实验最终结果， 把血标本置于抗凝真空采血管中，血液与抗凝剂的比例为9：1，为使血液与抗凝剂充 分混匀，轻轻摇晃采血管。在抽完血标本10分钟内必须完成实验室染色等操作步骤。 实验荧光染色方法： PE、PAC．1、CD61 1．首先在实验对照管中分别加入IgGl PerCP荧光抗体各 20肛L，再加入RGDS试齐010¨L。 2．然后在试验管中分别加入PAC一1FITC，CD62P PE，CD61 PerCP荧光抗体 各20“L；再在对照管和试验管中各加入鲜血标本5此，使血液标本与各种试剂轻 轻混匀后，放在实