肾素(前体)受体系统致人静脉内皮细胞损伤机制的探究.pdfVIP

肾素(前体)受体系统致人脐静脉内皮细胞 损伤机制的研究 硕士生姓名： 任丽丽 专旨导教师： 姜一农 教授 指导小组： 路岩 副教授 专业名称： 内科学 摘 要 近年来，人们发现了肾素．血管紧张素系统(reninangitensinsystem， RAS)中另一活性物质：肾素(前体)受体。目前人们克隆出两种肾素(前体) 受体，一种是6．磷酸甘露糖／II型胰岛素样生长因子受体 factorII (mainnose-6-phosphate／insulin-likegrowth receptor， M6P／IGF2R)，被人们认为在肾素(前体)的清除机制中发挥重要作用。另 一种是功能型受体：肾素(前体)受体【(pro)renin 心肾疾病中的作用越来越受到人们的关注，现已证实其存在于肾系膜细 胞、血管平滑肌细胞、肾脏、心脏及大脑等细胞组织中。该受体与肾素(前 Ang．II)途径，激活细胞内信号转导通路，上调某些基因的表达。丝裂原 活化蛋白激酶(mitogen．activatedproteinkinases，MAPKs)是细胞内的一 类丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，其存在于大多数细胞内，可将细胞外刺激信 号转导至细胞及其核内，并引起细胞生物学反应(如细胞增殖、分化、转 化及凋亡等)，哺乳动物细胞中已鉴定的3个主要的MAPK亚族包括： kinasel and 细胞外信号调节蛋白激酶(extraeellularsignal—regulated 2， ERKl／2)_亚族，p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPKs)亚族和c．Jun氨基 MAPKs 末端激酶(JNK)亚族，其中细胞外信号调节激酶ERKl／2及p38 信号转导通路在炎症和氧化应激中起重要作用。本课题组前期工作已证 umbilicalveinendothelian 实(P)RR存在于人脐静脉内皮细胞中(human SOD的影响尚无报道，(P)RR致炎症反应及氧化应激作用是否与信号通 路ERKl／2及P38MAPKs有联系还不清楚。 目的：在体外培养的HUVECs中，观察肾素(前体)激活(P)RR及干 扰(P)RR后对ERKl／2及p38MAPKs信号通路蛋白表达、血管细胞间粘 celladhesion 附分子(vascular molecule—l，VCAM一1)蛋白表达及超氧化物 歧化酶(superoxide 损伤性心血管疾病的关系。 方法： 1．体外培养原代HUVECs，CD34流式细胞鉴定。 48及72小时后(P)RR的mRNA表达，确定干扰效率最佳时间点。 35，60，90分钟收取蛋白，用western blot法检测ERKl／2及p38信号通 路蛋白磷酸化程度，确定肾素及其前体刺激致两信号通路蛋白磷酸化的 最强时间点。 4．以奥美沙坦和PDl23319处理HUVECs30分钟后，分别以人重组 肾素及肾素前体刺激HUVECs，分别用westernblot法，ELISA法和比 色法观察肾素及其前体是否可使信号通路蛋白ERKl／2及p38磷酸化增 强、粘附分子VCAM．1表达增高、抗氧化酶SOD含量降低，以及干扰 (P)RR表达后是否可阻断或减弱肾素及其前体的上述作用。 结果： 1．CD34流式细胞鉴定，HUVECs百分率达98．35％。 mRNA在HUVECs中表达最弱。 干扰(P)RR后72小时，(P)RR 8磷酸化程 磷酸化水平增强，在肾素作