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蛋卷中三聚氰胺HPLC定量分析结果不确定度的评定 摘要：建立了HPLC法测定蛋卷中三聚氰胺含量的不确定度模型，通过对测试方法流程进行分析，确定不确定度来源，对各不确定度分量进行了评定和量化。求得当蛋卷中三聚氰胺含量为8.49 mg/kg时，扩展不确定度为0.32 mg/kg。 关键词： 蛋卷；三聚氰胺；HPLC；不确定度；评定 Valuation of Measurement Uncertainty of Analytical Results for the Determination of Melamine in Egg Roll by HPLC Abstract：A mathematic model for the HPLC determination of melamine in egg roll was established. Analyzing the uncertainty sources arising from the procedure of analysis, the uncertainty components were evaluated and quantified. The expanded uncertainty was 0.32 mg/kg with 8.49 mg/kg of the content of melamine. Keywords：Egg Roll；Melamine；HPLC；Uncertainty；Evaluation 本文按照《测量不确定度评定与表示》［1］（JJF1059-1999）和《化学分析中不确定度的评估指南》 （CNAS-GL06）［2］中规定的方法和要求，采用《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T 22388- 2008），对测定蛋卷中三聚氰胺含量的不确定度来源进行了分析和探讨，并对测量不确定度进行了评定［3-4］，提出了在测定过程中减小不确定度的工作重点。 1 试验部分 1.1 仪器与试剂 岛津公司LC-20A 高效液相色谱仪；SPD-M20A 二级管阵列检测器；Lcsolution Ver1.24色谱工作站。三聚氰胺标准品：纯度99.5％，德国Dr. Ehrenstorfer 公司。 安捷伦公司阳离子交换固相萃取柱，甲醇、乙腈为色谱纯，其他为分析纯，二次蒸馏水。 1.2 色谱条件 Discover 反相C18色谱柱（250 mm×4.6 mm i.d.，5 μm）；流动相：离子对试剂缓冲液-乙腈(8：92)；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；波长：234 nm；进样量：20 μL。 1.3 样品制备 准确称取2.00 g蛋卷样品于50 mL离心管中，加入15 mL三氯乙酸溶液和2 mL乙腈，漩涡振荡3 min，4000 r/min离心10 min。依次用3 mL甲醇和3 mL水活化固相萃取柱，准确移取5 mL离心液上柱，用3 mL甲醇和3 mL水洗涤，抽至近干后，用6 mL氨化甲醇溶液洗脱，洗脱液用氮气吹干，残留物用1 mL流动相定容，漩涡混合1 min，滤过，待用。空白试验、回收率试验采用相同方法操作，采用保留时间定性，以标准曲线外标法定量。 2 结果与讨论 2.1 数学模型的建立 根据测量方法建立样品中三聚氰胺含量的数学模型如下： 式中：w—样品中三聚氰胺的含量，mg/kg；c—由标准曲线求得样液中三聚氰胺的浓度，μg/mL；V—定容体积，mL；m－取样量，g；frep—重复性因子；frec—回收率校正因子，其值为回收率的倒数。 2.2 不确定度分量的评定 2.2.1 校准过程引入的相对标准不确定度 包括采用最小二乘法拟合标准工作曲线求得试样浓度c样过程中所引入的不确定度，标准品纯度、称量引起的不确定度，配制标准使用液时用1 mL、2 mL单标移液管和50 mL、100 mL单标容量瓶引入的不确定度。因校准和使用温度相同，故不考虑温度的影响。 2.2.1.1 标准品纯度引起的相对标准不确定度 三聚氰胺标准品的含量为99.5％，标准证书给出扩展不确定度为±0.5％，k=2，其相对标准不确定度为：。 2。.2.1.2 称量标准品时引入的相对标准不确定度 称量标准品所用的天平其仪器计量检定证书给出扩展不确定度U=0.4 mg（k=2），标准品称样量为100 mg，称量标准品引入的相对标准不确定度为：。 2.2.1.3 标准使用液配制过程中引入的相对标准不确定度 按JJG 196-2006《常用玻璃量器》规定，A级1 mL、2 mL单标移液管容量允差分别为±0.007 mL、±0.010 mL。取矩形分布，则移液管引入的相对标准不确定度为： ，。 按JJG196-2006《常用玻璃量器》规定，A级50 mL、