蜂蜜中掺入果脯糖浆的检测方法.docVIP

蜂蜜中掺入果脯糖浆的检测方法 糖浆, 果脯, 蜂蜜, 淀粉, 活性炭 本方法是本人跟据几种不同版本的资料结合自己的经验整理而成的，提供给需要的朋友作个参考TLC检测方法原理：样品中的高分子糖，经活性炭—硅藻土柱的富集、浓缩，再用薄层色谱法分离、检测，经与掺有一定含量高果糖淀粉糖浆的纯蜂蜜比较，来判断蜂蜜中高果糖淀粉糖浆的存在与否。它是利用蜂蜜与异果化糖中的糖成分的不同之原理形成的方法，异果化糖中含有由淀粉原料转化的高分子糖类，而蜂蜜中不存在。本方法判定为阳性的并不是蜂蜜本身。假如残留有喂养中使用过的糖浆等高分子糖，本方法的结果可能呈阳性。1. 试剂与材料? ? 除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。1.1 无水乙醇? ?1.2 正丁醇1.3 醋酸1.4 丙酮 1.5 磷酸1.6 粒状/粉末状活性炭 1.7 硅藻土, 载体5451.8 苯胺1.9 二苯胺盐酸盐1.10乙醇溶液(7+93)：移取35ml无水乙醇至500ml试剂瓶中,加入465ml水,混匀。1.11乙醇溶液(1+3)：移取125ml无水乙醇至500ml试剂瓶中,加入375ml水,混匀。1.12乙醇溶液(1+1)：移取250ml无水乙醇至500ml试剂瓶中,加入250ml水,混匀。1.13展开剂：正丁醇+醋酸+蒸馏水(2+1+1)1.14显色剂：称取1g二苯胺盐酸盐,加入50.0ml丙酮,再加入1ml苯胺,混和搅拌,同时加入5ml磷酸,温热完全溶解后使用，随用随配。或者放入冰箱中冷冻保存，用时提前30分钟取出升温，同时应避光。（注1）1.15薄层层析板：硅胶G板,膜厚0.20-0.25mm、100mm×200mm。用前在110℃活化1h后，置于干燥器中冷至室温，备用。1.16玻璃棉或脱脂棉1.17蒸馏水。2. 仪器与设备:2.1层析柱：带旋塞的玻璃柱,长300-400㎜,内径20-22㎜,上端有19/24的接口。2.2恒温干燥箱。2.3旋转蒸发器,配真空冷却系统。2.4玻璃喷雾器。2.5薄层色谱展开槽。2.6微量注射器：10ul。2.7分析天平：感量0.0001g。2.8吹风机。2.9干燥器：盛有硅胶干燥剂。2.10收集瓶：500ml平底烧瓶、250ml茄型瓶和30ml鸡心瓶。2.11 漏斗：400ml(下端带有19/24大小的接口的直漏斗)。2.12 活性炭-硅藻土柱：玻璃层析柱底部加少量水，再加入少量玻璃棉或者脱脂棉（注2），关闭活塞后加入蒸馏水到玻璃管中部，然后放水除去玻璃棉中的气泡至水量10ml时关闭活栓。称取2.0g硅藻土于小烧杯中，加入少量水搅拌后移入层析柱，打开活栓使其沉降形成约1cm厚的硅藻土层，等水柱降至1cm~1.5cm时，把事先称取好的活性炭和硅藻土混合物(1+1)12g，（注3）用150ml水溶解、搅拌并洗涤后，倾入柱中。打开活栓，在真空抽气泵的吸引下使活性炭和硅藻土混合物沉降。当水面到达柱面1cm时关掉活塞，再次注入2.0g用水混好的硅藻土，打开活栓使其沉降形成1㎝厚的硅藻土层（注4）。在玻璃管上端放置一个400ml的直漏斗，用500ml水以5ml/min速度预洗活性炭一硅藻土柱，液面到达柱上1cm时关掉活栓，备用（注5）。注意在使用前填装，如暂时不用，可用50%乙醇溶液200ml浸泡，用前再用250ml蒸馏水预洗。（注6）3. 分析步骤:3.1 样品前处理称取1g蜂蜜样品精确到1mg,置于50ml烧杯中，加10ml水溶解后，缓慢加到活性炭-硅藻土中（注7），打开活栓，使试料溶液通过柱子。分两次各用5ml水冲洗烧杯，冲洗液也加入柱中，液面下降到柱面上端1cm时关闭活栓，量取7%乙醇溶液300ml加到柱中，洗涤柱子，弃掉洗脱液（注8），再加入25%乙醇溶液100ml洗涤，弃掉洗脱液（注9），然后再加入50%乙醇溶液100ml,在同样条件下洗脱（注10），洗脱液收集在200ml的茄形瓶中。用旋转蒸发器在75℃水浴中旋转蒸干，在茄形瓶中加入50%乙醇溶液2~5ml洗涤茄形瓶，使溶出物完全溶于乙醇，并将洗涤液移入30ml鸡心瓶中，旋转蒸发。再重复上述操作两次。等鸡心瓶完全蒸干后，在65℃条件下，减压干燥30min。干燥后把鸡心瓶取出，加0.1ml的水洗涤至溶出物完全溶解，作为薄层层析样液。3.2 薄层层析用10微升微量注射器在距离薄层板下端2.0 cm的位置，点上2.0ul样液（注11）,水平间隔1cm，左右边各1.5cm。点上同样量经过同样处理的纯蜂蜜（阴性对照样）和含有5%高果糖淀粉糖浆的蜂蜜标准液（阳性对照样）作为对照。把薄层板放入展开槽中（注12），按倾斜上行法展开，当展开剂前沿到达薄层板顶端时（注13），从展开槽中取出薄层板，用吹风机把展开剂完全吹散后，把