蛋白质测定不确定度分析.docVIP

食品中蛋白质含量测量结果不确定度评定 依据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》、 CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》 和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析 1. 测定方法 按照国家标准GB5009.5-2010《食品安全国家标准 食品中蛋白质的测定》中规定的第一法，即凯氏定氮法进行测定。 检测原理为：含氮有机化合物，与硫酸一同加热消化，使蛋白质分解，分解产生的氨与硫酸结合生产硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再以盐酸标准溶液滴定，根据盐酸的消耗量乘以换算系数即测得蛋白质的含量。检验过程如下： 1) 称取样品：用精度为0.1mg的精密电子天平称取0.2～2g样品，称准至0.1mg； 2) 消解：加入0.2g硫酸铜、6g硫酸钾、20ml硫酸加热消解至完全； 3) 定容：消解液冷却后，加水定容至100ml； 4) 蒸馏：吸取5.00ml样品处理液于蒸馏反应室内，加10.0ml氢氧化钠溶液（400g/L），硼酸溶液接收； 5) 滴定：以0.1mol/L的盐酸标准溶液滴定接收液至终点。 测量流程方框示意图 3. 蛋白质含量的计算 式中： X——试样中蛋白质含量，单位为克每百克（g/100g）； V1——试样消耗标准溶液的体积，单位为毫升（ml）； V2——试剂空白消耗标准溶液的体积，单位为毫升（ml）； V3——吸收消化液体积，单位为毫升（mL）； m——试样质量，单位为克（g）。 4. 不确定度的来源 计算蛋白质含量不确定度的来源及有关量值见下表： 温度： 22℃ 湿度：50%RH 参数 X U（x） U（x）/x rep 14.02 0.0071 0.05% 1.86 0.00045 0.60% 0.09986 / 0.8% 100 0.01570 0.01570% （移液管） 10.00 0.0053 0.05% （滴定管 10.00 0.0060 0.06% 0.5 0.0577 0.00535% 4.1 测量重复性带来的不确定度分量（含人员、环境、测量方法和仪器重复性等其他分量的贡献），用凯氏定氮法对样品（编号：1036）进行2 次重复测定, 有关数据及结果见表1 表1 食品中蛋白含量两平行样测量原始记录及结果 m/(g) V1/(ml) V2/(ml) (V1-V2)/(ml) X 1.0580 1.85 0.02 1.83 14.02 1.0977 1.92 0.02 1.90 14.03 平均数 1.0778 / / 1.86 14.02 s(xi)==0.0071 0.05% 4.2样品扣除试剂空白后消耗盐酸标准溶液带来的标准不确定度 10ml滴定管的标准不确定度来源： 滴定管的不确定度，允差为± 0.2ml，按均匀分布换算成标准不确定度： 滴定体积的重复性以通过重复性实验考虑过了，包含在内 滴定管和溶液的温度与校正时温度不同引起的体积 不确定度u2： 本次实验温度为22℃，水的膨胀系数为2.1×10-4，假设温度变化按均匀分布，换算成标准不确定度0.00045 ml =0.012；0.06% 4.3标定盐酸标准溶液标准带来的标准不确定度 ①标定盐酸用基准碳酸钠纯度为100% ± 0.05%，按均匀分布转换成标准偏差： =0.0005/√3 =0.00029 ②基准试剂称量的相对不确定度，天平的准确度为σ＝0.01mg，平均称样量为0.20682g，采用矩型分布计算标准不确定度： ；0.003% ③标定时50ml滴定管引入的相对不确定度分量 公差为± 0.04ml，平均滴定体积为39.06ml，按矩形分布 0.6% 滴定管和溶液的温度与校正时温度不同引起的体积 不确定度： 盐酸标定时实验温度为25℃，平均滴定体积为39.06ml，水的膨胀系数为2.1×10-4，假设温度变化按均匀分布，换算成标准不确定度 0.024ml；=0.6% ⑤测量重复性带来的不确定度分量为0.1%（含人员、环境、测量方法和仪器重复性等其他分量的贡献） 0.8% 4.4用10ml 移液管移取样品消化液带来的标准不确定度 10ml 移液管公差为± 0.02ml，按矩形分布。 温度校正0.0045ml =0.0053； 4.5用100ml 容量瓶定容带来的标准不确定度 100ml 容量瓶公差为± 0.08ml，按矩形分布。 ； 温度校正 ；0.0157% 4.6用10ml滴定管带来的标准不确定度 移液管校准 温度校正 ； 4.7样品称量带来的标准不确定度 天平的准确度为σ＝0.1mg，