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蛋白质工程提高蛋白质稳定性的研究进展 摘要：提高蛋白质的稳定性已经成为生物学以及蛋白质工程领域的研究热点。蛋白质工程的基本目标是按预期的结构和功能，通过分子设计和DNA重组技术对现有蛋白质加以定向改造、设计、构建并最终生产出性能比天然蛋白质更加优良、更加符合人类社会需要的新型蛋白质。在蛋白质工程的研究中，提高蛋白质稳定性是一个重要目标。本文具体阐述了蛋白质不稳定的原因、提高蛋白质稳定性的途径以及目前的一些方法，着重讲了蛋白质工程技术中的理性设计。最后对现阶段关于提高蛋白质稳定性的研究进行了总结。 关键词：蛋白质工程；蛋白质；稳定性 Abstract: It has already been a research hotpot in the biology and protein engineering to improve the stability of the protein. The basic goal of protein engineering is to produce a protein which is better than the nature protein through the molecular design and DNA recombination technology, based on the expected structure and function. The new protein is more in the line with the human society’s needs. In this paper, the reasons which lead to protein’s instability, the ways to improve the stability of protein, and the process in the protein stability research are detailedly presented. And the emphasis is on the rational design. In the end, the present research in improving the stability of protein is summarized. Keywords: protein engineering; protein; stability 前言 蛋白质工程是以蛋白质的结构与功能的关系研究为基础，利用基因工程技术对现存蛋白质加以改造，组建成新型蛋白质的现代生物技术。蛋白质是由许多氨基酸按一定顺序连接而成的，每一种蛋白质有自己独特的氨基酸顺序，所以改变其中关键的氨基酸就能改变蛋白质的性质。而氨基酸是由三联体密码决定的，所以只要改变构成遗传密码的一个或两个碱基就能通过改变氨基酸达到改造蛋白质的目的。蛋白质有很多生物学特性，其多种多样的生物学功能与其特定的空间构象密切相关，当蛋白质的构象发生变化时，会使其功能活性也随之改变。对于蛋白质而言，其稳定性是非常重要的。因此，蛋白质工程在维持蛋白质稳定性上起到了至关重要的作用[1]。 目前对许多蛋白，如T4溶菌酶和芽孢杆菌RNA酶已有系统研究，揭示了影响稳定性的一些重要结构因素。并用于改善重要的工业用酶的稳定性。随着突变方法、突变体高通量筛选技术、基因结构与功能研究的突破。特别是PCR技术的进一步成熟，DNA改组技术更加成熟．使得DNA改组成为蛋白质体外分子进化的主流技术。DNA改组或家族改组是通过单个基因或多个家族基因产生同源重组的突变库．并结合有效的筛选策略获得具有目标性状的蛋白。DNA改组技术具有许多重要优点。例如不需要事先了解结构信息，也不需要了解蛋白质的功能关系，其缺点是需要配合快速、可靠的鉴别突变体的方法。 1 影响蛋白质稳定性的因素 1.1 疏水相互作用 在水介质中球状蛋白质的折叠总是倾向于把疏水残基埋藏在分子的内部，这一现象被称为疏水相互作用。疏水相互作用并不是疏水基团之间的吸引力，而是疏水基团或疏水侧链出于避开水的需要而被迫接近。疏水相互作用主要影响蛋白质的构象熵，是蛋白质三级结构的形成和稳定中最重要的一个因素[2]。 1.2 氢键 氢键是指氢供体和氢受体的之间距离不超过3A，并且氢供体与氢受体之间的夹角小于90o时形成的非共价键。氢供体与氢受体广泛存在于蛋白质的主链、侧链以及蛋白质周围的水分子中，因此在多肽链内以及蛋白质与周围的水介质之间都可以形成氢键。在蛋白质内部形成一个氢键所获得平均能量约为0.6 kcaL/mol[3]。 1.3 离子键 带有相反电荷的氨基酸残基之间的静电力称为离子键或盐键(ionic bond)，离子键对蛋白质的热稳定性具有非常重要的作用阳