哮喘小鼠血清IL-17的变化和布地奈德对其干预作用的研究.pdfVIP

哮喘小鼠血清IL．17的变化及布地奈德对 其干预作用的研究 硕士生姓名：朱晶文 指导教师：马路一教授 专业名称：儿科学 摘要 目的建立OVA致敏和激发的昆明小鼠哮喘模型，观察肺泡灌洗液中细胞分 类的变化，哮喘组肺组织的病理改变以及IL．17、IgE在哮喘组、布地奈德干预组及 正常组小鼠血清中的变化，探讨IL．17在哮喘发病机制中的作用以及糖皮质激素的 早期干预对哮喘病理变化的影响。 方法SPF级雌性昆明小鼠(大连医科大学实验动物中心)，4-45周龄，体重 18～209，随机分为3组，每组10只，A组为哮喘模型组，B组为布地奈德干预组，C 组为正常对照组。A、B组小鼠于实验流程第O，7，14天给予腹腔注射 OVA20腭+l OVA-NS(29／L) 50肛L灿(OH)3+50pLNS致敏；第27，28，29天，给予50pL 入，每天1次，每次持续约30min。B组首先给予布地奈德溶液50止滴鼻干扰，l 小时后再雾化，雾化吸入OVA溶液方法同A组，C组以生理盐水代替致敏液、激发 液及雾化液，方法同A组。在最后一次激发24h后，摘取小鼠眼球放血后将其颈 椎脱臼处死，三组小鼠行支气管肺泡灌洗术。将回收的肺泡灌洗液涂片，固定， 光学显微镜下进行细胞总数和分类的计数。细胞分类至少计数400个细胞，求出 嗜酸性粒细胞所占百分比。三组小鼠开胸取出肺组织，置于10％的中性甲醛固定 液中固定。常规取材、脱水、石蜡包埋、制备石蜡切片、HE染色，光学显微镜下 观察气道组织形态、气道上皮损伤、气管及血管周围嗜酸性粒细胞浸润情况。外 其余上清液保存于4C测IgE。采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检 测三组小鼠血清IL．17A、lee水平表达情况。 结果： 1．激发过程中哮喘组小鼠出现不同程度的前肢搔鼻，烦躁不安，之后俯伏不 动，呼吸急促，二便失禁、皮毛失去光泽等症状：布地奈德干预组小鼠布地奈德干预 前症状同哮喘组小鼠，干预后此类症状明显减轻：而正常对照组小鼠无此类症状。 2．肺组织病理观察结果：在高倍镜下观察，哮喘组小鼠气管壁增厚，管腔变形， 呼吸道可见上皮细胞脱落，黏液分泌明显增多，平滑肌层增厚，黏膜下及管壁周围 炎性细胞明显浸润。布地奈德干预组可见上皮细胞偶有脱落，黏膜相对光滑完整， 管壁增厚及炎症细胞浸润均明显轻于哮喘组。正常对照组肺组织几乎无上述病理 改变。 ． 3．肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞百分比：肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞百分比：哮喘 组肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞为15．503％士1．235％，干预组肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞 百分率为4．628％士1．440％，正常对照组肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞百分率为1．892％ 士1．029％，哮喘组肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞百分率显著高于干预组和正常组 (P0．01)。 著增高，与干预、正常组相比差异均有统计学意义(Po．01)。 5．Ige：IgE在哮喘组小鼠血清中的浓度为6．939士0．119(ng／m1)，IgE在对照组 差异均有统计学意义(Po．01)，干预组与正常组相比，IgE水平的差异无统计学意义 ◇0．05)。 6．哮喘组肺组织中IL．17A水平与血清中IgE水平、BALF中嗜酸性粒细胞比 例呈正相关(分别为r=0．720，P=0．019；r=0．892，P=0．001)。 结论： 1．成功建立小鼠哮喘模型，其病理变化符合哮喘的病理生理改变。 2．IL．17通过招募炎性分子在气道聚集，引起气道的慢性炎症，参与了哮喘的发 病。 3．糖皮质激素可抑$IJIL．17的分泌，使炎症细胞在肺部的浸润减少，减轻肺部的 炎症反应，防止气道重塑。 关键词：小鼠哮喘IL．17糖皮质激素气道重塑 2 A onthediversificationofInterleukin一17of stuty asthmamouseandthe