产蛋白酶菌的筛选及产酶条件优化.docVIP

大庆师范学院 本科生毕业论文 蛋白酶产生菌培养条件的条件优化 院(部)、专业 生命科学学院 生物技术 研 究 方 向 微生物学 学 生 姓 名 朱琳 学 号 200901122598 指导教师姓名 张亦婷 2013年 06月 01日采用学院附近土壤、农田土壤及附近土壤作为样品，从中筛选分离得到产蛋白酶能力较高的菌株，初步鉴定该菌株芽孢杆菌。对其产酶条件进行优化，结果显示该菌最佳碳源为质量浓度，最佳氮源为质量浓度，最适初始pH值为6.，最适发酵温度为35℃：菌种筛选鉴定蛋白酶条件优化Abstract The sewage treatment plant soil near east institute, soil and soil samples near farms .Using milk hydrolysis circle screening model separating screening in high ability get protease whr1 strains. Preliminary appraisal of the fungus belong to bacillus. After the optimization of the condition, the capability of whr1 was improved, the optimal condition is: carbon source is sucrose 15g/L; nitrogen source is Yeast extract 20g/L, the pH is 6.5; fermentation temperature is 35℃. Key words：Screening；Identified；Protease；Conditions optimization  目 录 摘 要 I Abstract II 1 引言 2 材料与方法 5 2.2.2 实验材料 5 2.2.1 菌株筛选 5 3.1 菌株筛选 8 3.1.1 菌株的分离筛选 8 2.3 条件优化 9 2.3.1 不同碳源对产酶的影响 9 2.3.3不同氮源对产酶的影响 9 2.3.4 培养基不同初始pH值对产酶的影响 10 2.3.5 不同温度对产酶的影响 10 4 结 论 11  1 引 言 蛋白酶是催化蛋白质中肽键水解的酶，是一类广泛应用于皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、酿造等方面的重要工业用酶，也是目前世界上产销量最大的商业酶，其市场占有率约占整个商品酶销售量的60％，微生物蛋白酶从微生物中提取，不受资源、环境和空间的限制，具有动物蛋白酶和植物蛋白酶所不可比拟的优越性。目前，蛋白酶的研究仍注重于新品种的发掘，并通过分离筛选、发酵条件优化和诱变育种或构建基因工程菌等综合手段获得高产蛋白酶的优良菌株。我国的蛋白酶研究还存在如微生物资源开发不足，蛋白酶种类较少，酶制剂品种单一等问题。 本论文从以下几方面对蛋白酶产生菌株进行较为系统的研究：从土壤中筛选出产蛋白酶能力较高菌株。对筛选出的菌株进行形态学的鉴定，将菌株初步确定到属。研究产蛋白酶菌株发酵产酶条件，对培养基成分和发酵条件进行优化，确定最佳培养基配方和发酵条件，进一步提高菌株的产酶活力。  2 材料及方法 2.1 实验材料与仪器 2.1.1 实验仪器 测定酶活方法：根据蛋白酶产氮量测定酶活力大小。将菌液用细胞破碎仪破碎10min，充分摇匀后用脱脂棉过滤，吸取绿叶10ml移至150ml锥形瓶中，加水50ml，1%酚酞指示剂0.2ml，以0.1NaOH标准溶液滴定至刚显红色（ PH 8.2 ），记下滴定数作为点酸，继续加甲醛10ml，用NaOH滴定至深红色（ PH8.5 ）为终点。加下滴定数。 2.2.3 产酶条件优化 不同碳源对产酶的影响：在100ml基础培养基中其他成分不变，选用4种浓度分别为5g/L，10g/L, 15g/L, 20g/L, 30g/L的不同的碳源，分别为牛肉膏、乳糖、淀粉、葡萄糖，37℃ 140 rpm培养24h，测其酶活。 不同氮源对产酶的影响：在100ml基础培养基中加入最优碳源，氮源改用5种浓度分别为5g/L，10g/L, 15g/L, 20g/L, 30g/L的不同的氮源，其他成分不变，分别是尿素、(NH4)2NO4、牛奶，37℃培养24h，测其酶活。 不同培养基初始pH值对产酶的影响：在100ml基础培养基中加入最优碳源、氮源，其他成分不变，选用5种不同的pH，分别是pH 6、pH 6.5、pH