小鼠低位直肠癌局部切除术联合CIK凝胶治疗预防复发的初步探究.pdfVIP

摘要 研究背景：直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，目前位于腹膜反折以 下的低位直肠癌手术方式根据肿瘤大小、临床分期、患者解剖特异性等因素， 可以选择腹会阴联合切除术(Miles)、肿瘤局部切除术和低位前切除术(10w anteriorresection，LAR)。为达到保肛目的而采取的低位前切除术存在吻合口复发 率增高的风险，而某些早期病变行局部切除术亦存在肿瘤局部复发的风险。目 前临床尚无降低上述风险的有效治疗方案。 目的：本课题拟建立进展期小鼠低位直肠癌局部切除术模型，术后辅以CIK 细胞凝胶治疗，初步探讨低位直肠癌局部切除联合细胞免疫治疗预防肿瘤复发 的效果，以期拓宽低位直肠癌保肛手术的适应证。 方法：1、评估低位直肠癌动物模型建立方法：40只BALB／c雄性小鼠分 为五组(n=8)：葡聚糖硫酸钠组，3％(w／w)浓度的葡聚糖硫酸钠溶液饮用七 天，诱导结肠炎后灌注Colon26结肠癌细胞致瘤；三硝基苯磺酸组，结直肠内 灌注30 50％(V／v)乙醇溶液，共两次，诱导结肠炎后灌注Colon26结 mg／mL 肠癌细胞致瘤；低浓度酸碱组，直肠内依次灌注100 mol／L的盐酸溶液与 gLO．1 26结肠癌细胞 氢氧化钠溶液以破坏直肠粘膜，生理盐水反复冲洗后灌注Colon 26结肠癌 致瘤；直肠粘膜磨损组，利用微型磨损器损伤直肠粘膜后灌注Colon 细胞致瘤；直肠粘膜下注射组，用注射器将Colon26结肠癌细胞直接注射入小 鼠直肠粘膜下致瘤。2、选取致瘤成功的小鼠，进行低位直肠肿瘤的局部切除手 1NF．Y、1Tn 术，评估手术成功率。3、获取小鼠脾脏淋巴细胞，利用tin IL一2及 小鼠CD3单抗将淋巴细胞诱导为CIK，与医用透明质酸钠凝胶等比例混合制备 工程化CIK细胞凝胶；4、选取16只低位直肠癌致瘤满意的小鼠，行肿瘤局部 切除后随机分为两组(n=8)：对照组不作进一步处理，实验组加用CIK凝胶治 疗。术后十二天从大体及组织病理切片观察肿瘤复发及抑制情况。 结果：1．直肠粘膜下注射组致瘤率为87．5％，直肠粘膜磨损组致瘤率12．5％， 其余各组未见致瘤。注射组与磨损组的肿瘤经组织病理切片观察证实为直肠肿 瘤，且肿瘤生长部位一致。2．小鼠原位直肠癌局部切除术成功率100％，未见小 鼠死亡、直肠瘘、感染等并发症。术后直肠癌复发率87．5％。3．手术加CIK凝胶 一——————————————————————————j!i!i二———————————————————————————————————————————一 ——-_____●●_●—_●____—____-—●-________●-_______-_____-●___-_____________●—--—●-●__——__-——————一一 治疗后，小鼠低位直肠癌复发率为12．5％，而单纯手术组复发率为62．5％。 结论：1．本课题通过评估不同的小鼠低位直肠癌模型建立方法，证实粘膜 下注射法可以获得高致瘤率的小鼠低位直肠癌模型。低位直肠癌的肿瘤位置靠 近小鼠肛门，方便直视下观察和手术操作。2．进展期小鼠低位直肠癌局部切除 手术成功率高，没有动物死亡或术后并发症的发生。3．使用CIK凝胶治疗能降 低进展期小鼠低位直肠癌局部切除术后的复发率。该方法具有潜在的临床应用 前景，将有可能拓宽低位直肠癌保肛手术的适应证。 关键词：动物模型；低位直肠癌；局部切除；复发；CIK细胞 II Abstract mostcommon is oneofthe